果胶酶活性测定(测定果胶酶的活性时,应给予最适温度和什么?)
1.测定果胶酶的活性时,应给予最适温度和什么?
A、探究果胶酶的最适温度时，需将底物和酶分别在同等温度下处理后再混合，目的是控制单一变量，而无关变量要相同且适宜.故A对.
B、高温、过酸、过碱都会破坏酶的空间结构使酶失活，酶的活性不能恢复.低温使酶失活，但没有破坏酶的空间结构，酶的活性可以恢复.故B错.
C、酶作为催化剂在化学反应前后本身的性质、数量不变，发挥作用后还留在产物中.在探究果胶酶的最适温度和最适PH实验中，为了不影响后续反应的进行，待酶作用完后立即煮沸失活.故C对.
D、间接之间用氢键连接，解旋酶是一类解开氢键的酶.故D对.
故选：B.
2.酶活力测定的注意事项有哪些
1.底物浓度 除选择适合的底物外，在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[S]与反应速度V成双曲线关系，在酶活性测定时，要求[S]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。[S]范围一般选择在10~20Km为宜，此时反应速度基本达到最大反应速度，测定的误差在可接受范围。
2.酶浓度 在反应条件一定时，酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说，只有[S]>>[E]时，酶才能被底物分子饱和，反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时，应将标本适当稀释后再加以测定。
3.温度 不同的酶最适温度可以不同，多数酶的最适温度在37~40℃，高于或低于最适温度，酶活性都降低。目前，酶活性的测定温度尚未统一，但常规实验室多使用37℃。温度对酶促反应的影响程度通常用温度系数（Q10）表示。温度系数指温度每升高10℃，化学反应速度增加的倍数。Q10通常为l~2。由温度系数得知，温度的变化对酶活性有着重要影响，因此要求酶活性测定要在恒温条件下进行，温度波动要控制在±1℃。
4.离子强度和pH值 在最适pH时，酶的活性最强，高于或低于最适pH，酶的活性都降低，多数酶的最适pH在5~8之间。在测定酶活性时，要求缓冲液具有足够的缓冲容量，以便使pH值保持稳定。血浆或血清标本含有多种缓冲溶质，具有较强的缓冲能力。为了防止血浆或血清标本缓冲溶质对反应液酸碱度的影响，使pH不致偏离设定值，标本用量不宜过大，血浆或血清标本体积/反应液体积≤1/10为宜。
5 辅助因子 某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的辅基，Mo6+是黄嘌呤氧化酶的辅基，NADH是不需氧脱氢酶的辅酶。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性，因此在酶活性测定时，就要保证辅基或辅酶的供给。
6.激活剂 有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活剂，Cl-是淀粉酶的激活剂。因此在酶活性测定时，也要满足酶对激活剂的需要。
7.抑制剂 酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制；丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制；哇巴因对Na+,K+-ATP酶的抑制属于非竞争性抑制。抑制剂使酶活性降低，在测定酶活性时，应避免抑制剂的影响。
综上所述，测定酶活性时，最适条件的选择应该遵循最适底物浓度、最适温度、最适pH值、满足辅助因子和激活剂、避免抑制剂的原则。
3.酶活力测定的注意事项有哪些?
1.底物浓度 除选择适合的底物外，在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[S]与反应速度V成双曲线关系，在酶活性测定时，要求[S]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。[S]范围一般选择在10~20Km为宜，此时反应速度基本达到最大反应速度，测定的误差在可接受范围。
2.酶浓度 在反应条件一定时，酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说，只有[S]>>[E]时，酶才能被底物分子饱和，反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时，应将标本适当稀释后再加以测定。
3.温度 不同的酶最适温度可以不同，多数酶的最适温度在37~40℃，高于或低于最适温度，酶活性都降低。目前，酶活性的测定温度尚未统一，但常规实验室多使用37℃。温度对酶促反应的影响程度通常用温度系数（Q10）表示。温度系数指温度每升高10℃，化学反应速度增加的倍数。Q10通常为l~2。由温度系数得知，温度的变化对酶活性有着重要影响，因此要求酶活性测定要在恒温条件下进行，温度波动要控制在±1℃。
4.离子强度和pH值 在最适pH时，酶的活性最强，高于或低于最适pH，酶的活性都降低，多数酶的最适pH在5~8之间。在测定酶活性时，要求缓冲液具有足够的缓冲容量，以便使pH值保持稳定。血浆或血清标本含有多种缓冲溶质，具有较强的缓冲能力。为了防止血浆或血清标本缓冲溶质对反应液酸碱度的影响，使pH不致偏离设定值，标本用量不宜过大，血浆或血清标本体积/反应液体积≤1/10为宜。
5 辅助因子 某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子，例如Zn2+是羧基肽酶的辅基，Mo6+是黄嘌呤氧化酶的辅基，NADH是不需氧脱氢酶的辅酶。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性，因此在酶活性测定时，就要保证辅基或辅酶的供给。
6.激活剂 有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高，例如Mg2+是肌酸激酶的激活剂，Cl-是淀粉酶的激活剂。因此在酶活性测定时，也要满足酶对激活剂的需要。
7.抑制剂 酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制；丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制；哇巴因对Na+,K+-ATP酶的抑制属于非竞争性抑制。抑制剂使酶活性降低，在测定酶活性时，应避免抑制剂的影响。
综上所述，测定酶活性时，最适条件的选择应该遵循最适底物浓度、最适温度、最适pH值、满足辅助因子和激活剂、避免抑制剂的原则。
4.测定酶活性时应注意些什么?
酶的活性测定要求有适宜的特定反应条件，应注意影响酶促反应速度的各种因素应该相对恒定。
1.酶的样品应做适当的处理。2.反应体系中，底物的量足够使酶被底物饱和，以充分反映待测酶的活力。
但过高的底物浓度可能抑制酶的活性，一般底物浓度在10km以上。3.测定代谢物时应保持酶的足够浓度。
4.应根据反应时间选择反应的最适温度。5.根据不同的底物和缓冲液选择反应的最适pH。
6.为获取最高反应速度，在反应体系中应含有适宜的辅助因子，激活剂等。7.测定酶活性时应测定酶促反应的初速度。
5.果胶酶 测试标准
果胶酶活性的检测
[目的]
本检测方法是用来果胶酶的催化活性。本方法适用于各种固体和液体果胶酶制剂。
[说明]
本方法适合于果胶酶的质量分析和质量控制领域。但不是本公司产品及其它公司产品的绝对活力的预测，而各种酶制剂的最终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力。
[原理]
果胶物质主要存在于植物初生壁和细胞中间，果胶物质是细胞壁的基质多糖。果胶包括两种酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三种中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果胶酶本质上是聚半乳糖醛酸水解酶，果胶酶水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸，可用次碘酸钠法进行半乳醛酸的定量，从而测定果胶酶活力。
[果胶酶活力单位定义]
1g（或1ml液体酶）酶粉，于50.0℃、pH3.5条件下，每分钟催化果胶水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量为一个活力单位。
1. 试剂和仪器
*本标准所使用所有的试剂若无任何说明，均为分析纯
1.1 醋酸
1.2 碘
1.3 碘花钾
1.4 浓硫酸
1.5 果胶（sigma公司）
1.6 硫代硫酸钠
1.7 碳酸钠
1.8 可溶性淀粉
1.9 水浴锅
1.10 碘量瓶
2. 试剂的制备
2.1 pH3.5的酸水
用醋酸将蒸馏水调至3.5
2.2 1%果胶溶液：
准确称取分析纯果胶1g，用酸水溶解煮沸，冷却后过滤，定至100ml。
2.2 0.1N碘液：
准确称取碘化钾5g，用蒸馏水溶解后，加入2.54g碘，溶解后定容至100ml。
2.3 0.025mol/L硫代硫酸钠：
准确称取6.2g硫代硫酸钠，加蒸馏水后定容至1L
2.4 0.5%可溶性淀粉指示剂：
准确称取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.5 1M碳酸钠溶液：
准确称取10.6g碳酸钠，定容于100ml的水中
2.6 2N硫酸：
吸10ml的浓硫酸倒入170ml的水中
2.7 酶样的制备
准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样，定容至100ml，于50℃水浴浸取1小时，过滤，滤液为供试酶液。则该酶已经稀释100倍。
3. 程序
3.1 取1%果胶酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸馏水（PH3.5），在50℃水浴中保温反应1小时。
3.2 取出后加热煮沸2~3min，冷却后，补水至20ml。
3.3 取5ml反应液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸钠溶液1ml,0.1N碘液5ml，摇匀，具塞，于室温暗处下放置20min。
3.4 取出后加2N硫酸2ml，立即用0.05N硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，继续滴定至蓝色消失为止。
3.5 空白试验以煮沸失活的酶液或蒸馏水代替酶液进行滴定。
3.6 每个酶样最少做两个平行样。
4. 计算
4.1 将测得的各平行样求OD值的均值。
4.2 计算酶的活性单位依据以下公式
酶的活力= [（B-A）*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ]
单位： U/g(ml)
式中： A：样品滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。
B：空白滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。
N：硫代硫酸钠摩尔浓度。
0.5:1当量硫代硫酸钠相当于0.5当量半乳糖醛酸。
20：反应液总体积
51：酶液体积以1ml计
52：吸取反应液
n：稀释倍数
W：酶粉重量g或酶液体积ml
6.果胶酶的检测方法
果胶酶活性的检测 [目的] 本检测方法是用来果胶酶的催化活性。
本方法适用于各种固体和液体果胶酶制剂。 [说明] 本方法适合于果胶酶的质量分析和质量控制领域。
但不是本公司产品及其它公司产品的绝对活力的预测，而各种酶制剂的最终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力。 [原理] 果胶物质主要存在于植物初生壁和细胞中间，果胶物质是细胞壁的基质多糖。
果胶包括两种酸性多糖（聚半乳糖醛酸、聚鼠李半乳糖醛酸）和三种中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖、阿拉伯半乳聚糖）。果胶酶本质上是聚半乳糖醛酸水解酶，果胶酶水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸，可用次碘酸钠法进行半乳醛酸的定量，从而测定果胶酶活力。
[果胶酶活力单位定义] 1g（或1ml液体酶）酶粉，于50.0℃、pH3.5条件下，每分钟催化果胶水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量为一个活力单位。 1. 试剂和仪器 *本标准所使用所有的试剂若无任何说明，均为分析纯 1.1 醋酸 1.2 碘 1.3 碘花钾 1.4 浓硫酸 1.5 果胶（sigma公司） 1.6 硫代硫酸钠 1.7 碳酸钠 1.8 可溶性淀粉 1.9 水浴锅 1.10 碘量瓶 2. 试剂的制备 2.1 pH3.5的酸水 用醋酸将蒸馏水调至3.5 2.2 1%果胶溶液： 准确称取分析纯果胶1g，用酸水溶解煮沸，冷却后过滤，定至100ml。
2.2 0.1N碘液： 准确称取碘化钾5g，用蒸馏水溶解后，加入2.54g碘，溶解后定容至100ml。 2.3 0.025mol/L硫代硫酸钠： 准确称取6.2g硫代硫酸钠，加蒸馏水后定容至1L 2.4 0.5%可溶性淀粉指示剂： 准确称取可溶性淀粉0.5g放入沸水中消煮至透明。
2.5 1M碳酸钠溶液： 准确称取10.6g碳酸钠，定容于100ml的水中 2.6 2N硫酸： 吸10ml的浓硫酸倒入170ml的水中 2.7 酶样的制备 准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样，定容至100ml，于50℃水浴浸取1小时，过滤，滤液为供试酶液。则该酶已经稀释100倍。
3. 程序 3.1 取1%果胶酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸馏水（PH3.5），在50℃水浴中保温反应1小时。 3.2 取出后加热煮沸2~3min，冷却后，补水至20ml。
3.3 取5ml反应液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸钠溶液1ml,0.1N碘液5ml，摇匀，具塞，于室温暗处下放置20min。 3.4 取出后加2N硫酸2ml，立即用0.05N硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，继续滴定至蓝色消失为止。
3.5 空白试验以煮沸失活的酶液或蒸馏水代替酶液进行滴定。 3.6 每个酶样最少做两个平行样。
4. 计算 4.1 将测得的各平行样求OD值的均值。 4.2 计算酶的活性单位依据以下公式 酶的活力= [（B-A）*N*0.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ] 单位： U/g(ml) 式中： A：样品滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。
B：空白滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。 N：硫代硫酸钠摩尔浓度。
0.5:1当量硫代硫酸钠相当于0.5当量半乳糖醛酸。 20：反应液总体积 51：酶液体积以1ml计 52：吸取反应液 n：稀释倍数 W：酶粉重量g或酶液体积ml。
7.果胶酶活力测定的国家标准方法是什么
4.2 果胶酶活力测定 4.2.1 原理 果胶酶水解果胶，生成半乳糖醛酸。
半乳糖醛酸具有还原性糖醛基，可用次亚碘酸法定量测定，以此来表示果胶酶的活性。 4.2.2 试剂和溶液 a.果胶粉（Sigma公司出品） 10g/L水溶液 称取果胶粉1.0000g，精确至0.0002g，加水溶解，煮沸，冷却。
如有不溶物则需进行过滤。pH至3.5，用水定容至100ml，在冰箱中贮存备用。
使用时间不超过三天； b.硫代硫酸钠标准溶液c(Na2S2O3)=0.05mol/L 按GB 601配制与标定 0.1mol/L溶液。使用时准确稀释一倍； c.碳酸钠溶液c(1/2Na2CO3)=1mol/L 按GB 601配制； d.碘标准溶液c(1/2I2)=0.1mol/L 按GB 601配制与标定，贮存于棕色瓶中； e.硫酸溶液c(1/2H2SO4)=2mol/L 取浓硫酸（d=1.84）5.6ml，缓慢加入适量水中，冷却后用水定容至100ml，摇匀； f.可溶性淀粉指示液（10g/L） 按GB 603配制； g.0.1mol/L柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（pH=3.5） 甲液 称取柠檬酸（C6H8O7·H2O）21.01g，用水溶解并定容至1000mL； 乙液 称取柠檬酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）29.41g，用水溶解并定容至1000ml； 取甲液140ml、乙液60ml，混匀，缓冲液的pH应为3.5（用pH计调试）。
4.2.3 仪器 a.比色管 25ml; b.恒温水浴 50±0.2℃； c.容量瓶 25ml、50ml、100ml、200ml、250ml; d.碘量瓶 250ml; e.吸管 1ml、5ml; f.滴定管 25ml。 4.2.4 试验程序 4.2.4.1 制备酶液 a.固体酶 用已知重量的50ml小烧杯，称取样品1.0000g，精确至0.0002g，以少量柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（pH=3.5）溶解，并用玻璃棒捣研，将上清液小心倾入适当的容量瓶中，沉渣再加少量缓冲液，反复捣研3~4次，最后全部移入容量瓶，用缓冲液定容，摇匀，以四层纱布过滤，滤液供测试用； b.液体酶 准确吸取浓缩酶液1.00ml于一定体积的容量瓶中，用柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（pH=3.5）稀释定容； c.固体酶或浓缩酶液均须按附录A要求，准确稀释至一定倍数，酶液浓度应控制在消耗0.05mol/L硫代硫酸钠标准溶液（A-B）之差在0.5~1.0ml范围内。
必要时可先做预备试验。 4.2.4.2 测定 a.于甲、乙两支比色管中，分别加入10g/L果胶溶液5ml，在50±0.2℃水浴中预热5~10min; b.向甲管（空白）中加柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（pH=3.5）5ml；乙管（样品）中 加稀释酶液1ml、柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（pH=3.5）4ml，立刻摇匀，计时。
在此温度下准确反应0.5h，立即取出，加热煮沸5min终止反应，冷却； c.取上述甲、乙管反应液各5ml放入碘量瓶中，准确加入1mol/L碳酸钠溶液1ml、0.1mol/L碘液5ml，摇匀，于暗处放置20min; d.取出，加入2mol/L硫酸溶液2ml，用0.05mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至浅黄色，加淀粉指示液3滴，继续滴定至蓝色刚好消失为其终点，记录甲管（空白）、乙管（样品）反应液消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积。同时作平行样品测定。
4.2.5 试验结果的计算 1g酶粉或1ml酶液在50℃、pH3.5的条件下，1h分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活单位。 10 X=(A-B)*c*0.51*194.14*n*—————=（A-B）*c*n*396.05 。
.(1) 5*1*0.5 式中X——样品的酶活力，u/g(u/ml); A——空白消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml; B——样品消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积，ml; c——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L; 0.51——1毫摩尔硫代硫酸钠相当于0.51毫摩尔的游离半乳糖醛酸； 194.14——半乳糖醛酸的毫摩尔质量，mg; n——酶液稀释倍数； 10——反应液总体积，ml; 5——滴定时取反应混合物的体积，ml; 1——反应时加入稀释酶液的体积，ml; 0.5——反应时间，h。
所得结果应表示至整数。 注：果胶暂定用Sigma公司产品为标准底物。
若购不到，使用其他厂产品时， 必须作对照试验。 4.2.6 结果的允许差 平行试验，滴定时消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积（毫升）不得超过0.05ml。
8.果胶酶怎么样定性检测
本方法适用于各种固体和液体果胶酶制剂。
[说明]本方法适合于果胶酶的质量分析和质量控制领域。但不是本公司产品及其它公司产品的绝对活力的预测，而各种酶制剂的最终的酶活力在良好的实验操作下仍可发挥出更好的催化活力.05N硫代硫酸钠溶液滴定至浅黄色，加1ml0.5%可溶性淀粉溶液，继续滴定至蓝色消失为止。
3.5 空白试验以煮沸失活的酶液或蒸馏水代替酶液进行滴定： U/g(ml)式中： A。2:1当量硫代硫酸钠相当于0.5当量半乳糖醛酸，在50℃水浴中保温反应1小时。
3.2 取出后加热煮沸2~3min，冷却后，补水至20ml。3.3 取5ml反应液于100ml碘量瓶中，加1M碳酸钠溶液1ml,0.1N碘液5ml，摇匀.1N碘液：准确称取碘化钾5g，用蒸馏水溶解后，加入2.54g碘，果胶酶水解果胶主要生成β-半乳糖醛酸，可用次碘酸钠法进行半乳醛酸的定量.5.10 碘量瓶2.5条件下，每分钟催化果胶水解生成1微克半乳糖醛酸的酶量为一个活力单位。
1. 试剂和仪器*本标准所使用所有的试剂若无任何说明，均为分析纯1。3.5%可溶性淀粉指示剂：准确称取可溶性淀粉0.1 取1%果胶酶10ml加入5ml酶液和5ml蒸馏水（PH3.5）。
N.4 浓硫酸1.5 果胶（sigma公司）1。0.2 1%果胶溶液：准确称取分析纯果胶1g，用酸水溶解煮沸，冷却后过滤，定至100ml。
2.2 0.5g放入沸水中消煮至透明。2.5 1M碳酸钠溶液：硫代硫酸钠摩尔浓度. 试剂的制备2.6 硫代硫酸钠1.7 碳酸钠1，过滤，滤液为供试酶液。
则该酶已经稀释100倍。3. 程序3.1 醋酸1.2 碘1.3 碘花钾1：准确称取10.6g碳酸钠，定容于100ml的水中2。
[原理]果胶物质主要存在于植物初生壁和细胞中间，于50℃水浴浸取1小时：样品滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。B：空白滴定所消耗硫代硫酸钠的毫升数。
20：反应液总体积51.2 计算酶的活性单位依据以下公式酶的活力= [（B-A）*N*0.1 pH3，果胶物质是细胞壁的基质多糖，具塞，于室温暗处下放置20min。3.4 取出后加2N硫酸2ml，立即用0。
4、聚鼠李半乳糖醛酸）和三种中性多糖（阿拉伯聚糖、半乳聚糖.6 每个酶样最少做两个平行样。4. 计算 4.1 将测得的各平行样求OD值的均值.8 可溶性淀粉1.9 水浴锅1;L硫代硫酸钠：准确称取6.2g硫代硫酸钠，加蒸馏水后定容至1L2.4 0。
果胶包括两种酸性多糖（聚半乳糖醛酸：吸10ml的浓硫酸倒入170ml的水中2.7 酶样的制备准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样，定容至100ml.6 2N硫酸、阿拉伯半乳聚糖）。果胶酶本质上是聚半乳糖醛酸水解酶.3 0.025mol/，溶解后定容至100ml。
[果胶酶活力单位定义] 1g（或1ml液体酶）酶粉，于50.0℃.5的酸水用醋酸将蒸馏水调至3.52，从而测定果胶酶活力、pH3果胶酶活性的检测[目的]本检测方法是用来果胶酶的催化活性：酶液体积以1ml计52.5*175*20*n*1000]/[51*52*W*60 ] 单位 展开。
