微生物安全知识(微生物实验室的安全操作规程)

1.微生物实验室的安全操作规程

抄的哦1 实验室安全 1.1 微生物实验室的生物安全性 1.2 科室安全文档 （a）生物危害防护：实际操作规程见（《实验室生物安全通用要求》，中华人民共和国国家标准GB19489-2004。

2004-01-05发布，2004-10-01实施。） （b）实验室安全：原则和措施见（《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》，中华人民共和国卫生行业标准WS 233-2002。

2002-12-03发布，2003-08-01实施。） 1.3 应用：以上的操作规程应用于微生物科室的所有部门。

工作人员或访问人员必须遵守各项规定。 1.4 关于新规定或现行规定的修改案：任何新规定或现行规定的修改案必须通知负责科室安全的人员及相关人员，他们将建议科室主任考虑实施。

1.5 生物性危害 1.5.1 与各种操作有关的生物危害水平取决于： a.处理的传染性物质的本身：按照传染性物质对个人和社区和潜在危险性以及经空气传播的可能性，其划分成不同等级。所采用的等级划分详见”《实验室生物安全通用要求》”；原则和措施（见《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》）。

b.使用的设备和设施： 处理不同等级的传染性物质的要求在”实验室安全”中已规定。这些符合要求的设备都要承担重要临床工作，科室负责人必须保证中应污染物水平。

c.培训，特别是员工的安全性培训和安全性经验积累。所有员工应该接受一定训练，能安全处理任何实验室可能碰到的物质，避免将实验不能处理或规定之外的传染性物质暴露在实验室，即使暴露事故在实验室，即使暴露事故发生也要会正确处理。

1.5.2 传染性物质的分类 1.5.2.1分类系统 生物危害防护：〔见1.2 (a)〕，根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级，危害等级Ⅳ最具危害性。 1.5.2.2危险群/生物安全水平：1-4 a.危险群/生物安全水平：1——对健康成人无致病性，对社区无危害性。

通常一般微生物操作就足够，不需特殊安全设备，工作的附近要有洗手设施。培养基上包含未鉴定物，因此，妥善处理对各级安全水平都至着重要。

b.危险群/生物安全水平：2——人类疾病相关物质，这种物质对实验室工作人员有中度危险，并具有一定程度社区危险性。医院微生物室所涉及的绝大多数物质属此安全水平，生物危害警告应张贴，并且限制接近，应用醒目标语，若是能产生空气传播或飞溅的I,II类物质都就使用相就的操作台。

实验室就提供类似防护衣和手套，眼罩尤其是配戴隐形眼镜者，也应提供类似安全水平的洗手设施，并且临近工作区也应有高压灭菌装置。所有废物和反复使用设备的去污染应有特定的程序。

c.危险群/生物安全水平：3——人类疾病相关物质，具有潜在空气传播性，能引起严重，致命疾病，对实验室工作人员高度危险，并具有一定程度社区危险性。所有含有或怀疑含有生物案的标本必须标以”小心污染”标签，并且同时标于盛放标本容器和申清单。

然而作为预防保护还不足够。应对所有血液，体液，分离的人体组织等有普通防护意识，它们都应视作传染源。

在此生物安全级，实验室应控制对其接近。凡涉及该类物质都应使用I或II类工作台操作，也可以遵循II级操作注意事项，对所有废物进行去污染处理，包括工作服和重复使用设备。

d.危险群/生物安全水平：4——对个人的危险如生物安全3级，但对社区有高度危险性。这些传染性物质包括： 蜱源性脑炎病毒 支里半亚-刚果牛血热病毒 Marburg Virus 艾波拉病毒 Lagsa fever Virus Junin HF Virus Machupo HF Virus Guanaruto HF Virus Herpesvirus simiae (B Virus) 1.6 以下预防措施，所有实验工作人员必须遵守： 1.6.1 工作服 a.所有实验室成员在工作期间必须始终穿着所提供的工作服。

离开实验室时，工作服须挂在指定地方，不得在实验室外冼工作服。 b.在处理含有或怀疑含有生物安全3级物质的标本时，必须在工作服外穿隔离衣。

c.在生物安全操作台内处理标本和培养基时，必须戴手套。 1.6.2 洗手池 洗手池须供应洗洁剂和纸巾。

1.6.3 洗手 所有工作人员在离开工作区必须洗手，并且要先脱去工作服和手套。 1.6.4 食物，饮水，吸烟，化妆品 食物和饮料不允许带入任何处理标本的房间.不允许在处理标本的任何地方吸烟.不允许在处理标本的任何地方使用化妆品。

1.6.5 伤口和擦伤 手上的伤口和擦伤必须覆盖保护物。 1.6.6 个人衣物 个人衣物不允许带入实验室，并且必须保存在带锁的柜子里。

1.6.7 口吸移液管 这是禁用的。要求使用机械移液装置。

1.7 常规预防措施应用于所有血液、体液、组织标本的操作中： 1> 无论何时都应尽可能避免使用注射器，针头或其它锐器。 2> 使用过的针头和一次性切割器必须丢入专门的带有盖子和桶内，以备安全处理、防止容器过满盛装。

3> 使用过的针头不许重新使用或再用手操作。 4> 打烂的玻璃必须放入坚硬的容器（不要用手），然后再放入黑色垃圾袋，如果是污染的，使用黄色垃圾袋。

5> 在接触具有潜在性传染性标本培养基、组织，必戴保护性手套，防止皮肤直接接触。如果手套有可见的污染，必须先除去污染，再更换。

手上有皮炎或伤口的工作人员的需要间接接触传染性物质的人员应戴保护性手套。 6> 在处理完标本、结束工作，甚至在上述规定带手套时。

2.微生物知识

美国药典（USP）中规定：“将微生物接种至一新鲜培养基上/内，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复溶并转至一培养基内生长，即认为已传代一次，” 并规定“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”。我国的GMP认证中也如此要求，并且中国药典2005年版药典也已做出“菌种的传代次数（自原始菌种冻干粉起）不得超过5代”这个明确的规定。

实验室菌种的传代保藏过程

1. 按菌种说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内（G1），复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代（G2）。

2. 菌种鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时，保藏菌种为第2代，但工作用菌种则为第三代。

3. 将第2代菌种管冷冻保存，将工作用菌种于适当温度下培养适当时间后可用于试验。

4. 取一支冷冻保存的G2代菌种转种于平板和斜面培养基上，平板上的菌种制成冷冻保藏管第三代（G3），斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种（W3）。

5. 将第三代菌种（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的G2菌种经灭菌处理后丢弃。

6. 当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如W3可直接转接为W4。

7. 按上述程序操作，直至G4转为W5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用菌种。

以上方法中，菌种被分为两类。传代用菌种和工作用菌种，传代用菌种用于甘油冷冻管法保藏，工作用菌种用斜面低温保藏法保藏。

实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于细菌（需氧）、酵母菌的传代、保藏、对厌氧菌、真菌和芽孢类细菌则需应用其它方法。

3.生物安全防护知识培训的基本内容有哪些

学员对象：各大医院、研究中心、实验室从事动物实验的科研人员、工作人员、管理人员等。

课程收益：实验动物相关实验室既涵盖了一般实验室的生物安全要求，同时也使得实验室生物安全变得更加复杂和多变，人员要求更加严格，生物安全事件也相对较多。因此，本课程将重点介绍一些动物实验相关实验室的生物安全知识。

课程内容： 【内训课程编号】N101077 【培训对象】各大医院、研究中心、实验室从事动物实验的科研人员、工作人员、管理人员等。【培训背景】 实验动物相关实验室既涵盖了一般实验室的生物安全要求，同时也使得实验室生物安全变得更加复杂和多变，人员要求更加严格，生物安全事件也相对较多。

因此，本课程将重点介绍一些动物实验相关实验室的生物安全知识。【培训大纲】 一、你有实验室生物安全意识吗？ ●实验室生物安全是每个实验室人员应该高度重视的问题，实验的每个环节都会有潜在风险。

大家并没有严格、专业的实验室风险识别和风险控制的意识和技能，实验室环境也没能形成安全、清洁的文化氛围，每天都会有许许多多程度不同的生物安全隐患和风险。 ●动物存在哪些危害，怎样防护等等问题，都需要我们认真思考，至少先要有良好的安全意识，然后形成实验室安全操作规范，通常国际上称为SOP，大家在实验之前，应该了解清楚，才能及时应用。

二、你做好动物实验的准备了么？在动手之前，你认真思考了以下问题吗？1、你真的了解实验动物么？ ●实验动物具有两大特点：一是为人类需要改变自己，似像非像原种动物，成为“病态异类”；二是由于遗传改变，原有抵抗病原的能力呈现不同程度下降，对病原谱系发生改变，更易得病。 ●实验动物、分泌物、排泄物、样品、器官、尸体等控制、操作不当会变成病原污染的扩大器，造成大范围传播，因此，了解实验动物特性，就知道了动物实验首先要做好思想准备，防备于未然。

2、你具备动物实验能力吗？ ●动物实验的能力，包括动物饲养能力、对动物认知能力、操作能力、信息采集能力、分析能力、关护能力和生物安全防护能力。具备了这些能力，才能完成良好的动物实验，同时保证实验中的生物安全。

●动物源人兽共患病，如出血热、结核病、狂犬病、菌痢、寄生虫等疾病更是直接威胁我们健康。实验既要了解病原的危害，也要了解动物感染后的危害，和可能的生物安全风险，操作中要提高能力，降低风险。

●动物活体检测、外科手术、活体采样、解剖取材等技能更是要求人员能够熟练掌握。必须经过严格培训，才能实际应用。

能力，是安全的保证。3、你知道动物实验要经过审查批准么？ ●动物实验方案审查的内容应该包括： 实验人员是否符合操作要求；设施设备是否符合动物要求；饲料、垫料、饮水是否符合动物要求；动物运输是否符合要求；实验方案是否符合动物福利要求；动物处置是否符合伦理规范；动物处死是否符合安乐死原则；动物尸体处理是否符合环保要求等等方面。

这些方面，都要有生物安全作为保障。动物实验福利、伦理、生物安全审查中应注意的问题非常多，主要人员培训情况； ●动物实验人员必须经过操作培训，包括：动物基本知识、动物操作、麻醉方法、手术方法、给药方法、取材方法、解剖方法、生物安全防护等各种操作，最好持有专业培训证书。

三、你具备动物实验生物安全防护能力吗？1、你了解动物实验可能的生物危害吗？ ●动物实验可能带来的危害主要有：一是动物咬伤、抓伤等直接危害；二是动物携带人兽共患病病原，在操作过程中通过空气、分泌物、直接接触等途径感染人类；三是人类高致病性病原感染动物实验，从动物或环境再感染人。 ●最常见的情况是，实验动物没有良好的设施、设备作保障，动物污染后处理不当，造成环境、动物、人员的生物危害。

2、你能识别造成动物生物安全风险的行为吗？ ●实验室活动，包括动物实验的每个环节都会存在风险。动物实验操作中除了我们熟悉的“3R”外，还有一个最重要的R，就是responsibility，是指责任、责任心。

关护动物，使动物处于相对安静状态，减少动物烦躁不安、过激行为、减少物质释放（如大动物激惹后呼吸增加、激烈活动时扬尘），均可降低产生风险。 ●需要识别的动物相关风险（10项）3、你知道生物安全管理、风险评估和风险控制吗？ ●生物安全风险评估和风险控制通俗地讲就是要了解实验可能的各种风险，万一出现了风险，马上采取相应的应对控制手段。

●管理：国家法规、条例、标准等。国家有专门的要求，病原按危害程度被分为1-4类，1-2类称为高致病性病原。

所有病原都应该在1-4级不同等级生物安全实验室中进行，并且事先做好生物安全风险评估和风险控制，严格操作，以确保安全。应根据危害程度分类，对特定的病原微生物采取相应级别的生物安全防护水平，减少人员暴露的危险和使环境污染降到最低限度。

●动物实验涉及的所有方面，包括动物、病原、试剂、操作等都应预先知道，并识别可能的危害。根据危害程度，提出风险评估，采取风险控制措施，是生物安全的核心工作。

●动物的风险评估应包括：动物等级、大小、特性、饲养、操。

4.微生物小知识

20

世纪以来，生物化学和生物物理学向微生物学渗透，再加上电子显微镜的发明和同

位素示踪原子的应用，推动了微生物学向生物化学阶段的发展。

1897

年德国学者毕希纳发

现酵母菌的无细胞提取液能与酵母一样具有发酵糖液产生乙醇的作用，

从而认识了酵母菌酒

精发酵的酶促过程，将微生物生命活动与酶化学结合起来。

诺伊贝格等人对酵母菌生理的研究和对酒精发酵中间产物的分析，

克勒伊沃对微生物代

谢的研究以及他所开拓的比较生物化学的研究方向，

其他许多人以大肠杆菌为材料所进行的

一系列基本生理和代谢途径的研究，都阐明了生物体的代谢规律和控制其代谢的基本原理，

并且在控制微生物代谢的基础上扩大利用微生物，发展酶学，推动了生物化学的发展。从

20

世纪

30

年代起，人们利用微生物进行乙醇、丙酮、丁醇、甘油、各种有机酸、氨基酸、

蛋白质、油脂等的工业化生产。

1929

年，弗莱明发现青霉菌能抑制葡萄球菌的生长，揭示了微生物间的拮抗关系，并

发现了青霉素。

1949

年，瓦克斯曼在他多年研究土壤微生物所积累资料的基础上，发现了

链霉素。

此后陆续发现的新抗生素越来越多。

这些抗生素除医用外，

也应用于防治动植物的

病害和食品保藏。

1941

年，比德尔和塔特姆用

X

射线和紫外线照射链孢霉，使其产生变异，获得营养缺

陷型。

他们对营养缺陷型的研究不仅可以进一步了解基因的作用和本质，

而且为分子遗传学

打下了基础。

1944

年，埃弗里第一次证实了引起肺炎球菌形成荚膜遗传性状转化的物质是

脱氧核糖核酸

(DNA)

1953

年，沃森和克里克提出了

DNA

分子的双螺旋结构模型和核酸半

保留复制学说。

富兰克尔

-

康拉特等通过烟草花叶病毒重组试验，证明核糖核酸

(RNA)

是遗传信息的载

体，为奠定分子生物学基础起了重要作用。其后，又相继发现转运核糖核酸

(tRNA)

的作用机

制、

基因三联密码的论说、

病毒的细微结构和感染增殖过程、

生物固氮机制等微生物学中的

重要理论，展示了微生物学广阔的应用前景。

1957

年，科恩伯格等成功地进行了

DNA

的体外组合和操纵。近年来，原核微生物基因

重组的研究不断获得进展，

胰岛素已用基因转移的大肠杆菌发酵生产，

干扰素也已开始用细

菌生产。现代微生物学的研究将继续向分子水平深入，向生产的深度和广度发展。

在微生物学的发展过程中，

按照研究内容和目的的不同，

相继建立了许多分支学科：

研

究微生物基本性状的有关基础理论的有微生物形态学、

微生物分类学、

微生物生理学、

微生

物遗传学和微生物生态学；

研究微生物各个类群的有细菌学、

真菌学、

藻类学、

原生动物学、

病毒学等；

研究在实践中应用微生物的有医学微生物学、

工业微生物学、

农业微生物学、

食

品微生物学、乳品微生物学、石油微生物学、土壤微生物学、水的微生物学饲料微生物学、

环境微生物学、免疫学等。

由于微生物学各分支学科的相互配合、

互相促进，

以及与生物化学、

生物物理学、

分子

生物学等学科的相互渗透，使其在基础理论研究和实际应用两方面都有了迅速的发展

5.微生物有哪些危害

微生物给人们带来益处，也造成危害。人们利用微生物酿酒，生产柠檬酸，制造抗菌素和酶制剂等。然而微生物也有有害的一面，人、动物和植物的大部分疾病，以及工业、商业、外贸等部门的许多材料和制品的霉变、腐蚀、受损，都是微生物造成的。

这里，我们先来谈谈微生物的破坏作用。

在银行，计算机电子回路的增强塑料表面繁殖了霉菌，会导致计算机发生故障，业务出现差错。

不论哪里的银行，尽管它建筑豪华、设施齐全，但由于每天有许多人进出，室内的微生物污染都十分严重。如果对室内空气中浮游的微生物进行一次测量，就会发现微生物的数量会出乎意料的多。其中还能分离出致癌性菌株黄曲霉和变色曲霉。

引起室内空气中微生物增加的原因很多，但值得注意的是进出银行的各个方面的人，他们将从毛发、衣着、手、物品中散布出微生物来。同时，粘附在纸币上的霉菌和细菌也会引起第二次污染。试验已经证明，在用纤维材料制作的纸张、地毯和木材上，有许多致病菌存在着。

这种令人忧虑的微生物污染状况除了银行之外，医院、饭店、写字楼、百货大楼、街道、新干线和地下铁路的电车、公共汽车等的内部也存在着严重的问题。特别是在医院中，每天病人云集，交叉感染时常发生。进入医院是为了治疗疾病，但医院又是可怕的微生物感染地，这对于一般人是想象不到的。