细胞融合的方法(细胞融合的基本原理和方法)

1.细胞融合的基本原理和方法

(1)病毒诱导助融

其实， 细胞融合在自然界是存在的， 细胞融合研究首先也是基于自发的细胞融合。1 9 5 7

年， 冈田善雄意外发现仙台病毒（ H vJ ） ， 能诱导悬液中艾氏腹细胞融合。然后H ar ri s 、

K a d a 等用于诱导种间细胞融合， 获得成功。

(2)化学助融

1 9 7 2 年， 卡尔森首先用硝酸钠进行烟草两个种的细胞原生质体的融合， 1 9 7 4 年Kao等首先发现PEG （ 聚乙二醇） 能诱导植物细胞原生质体融合产生杂交细胞。1975年Pentecorvo。发现PE G 亦能帮助哺乳类动物细胞的融合， 1 9 7 6 年D a vi d s o n 更进一步证实这一结果， 并且认为其具有简单快速、高效率等优点。因而， 75 年之后聚乙二醇就逐渐取代了仙台病毒。

(3)电融合法

电融合法是70 年代未期和80 年代初期发展起来的一种新的细胞融合方法。Senda (1970)

首先应用电脉冲， 通过微电极在显微镜下使植物细胞融合， 奠定电融合技术基础

(4)激光诱导卵细胞融合

激光诱导卵细胞融合是最新的细胞融合方法。该法为张闻迪（ 1 9 8 8 ） 等人首先应用。他们利用激光微束的单色性、高功率密度、短脉宽和极小的作用范围等特点。对泥鳅受精卵进行

融合试验， 获得成功， 且融合后的细胞可存活发育， 经卵裂期、囊胚期、原肠期、孵化期、

直至幼鱼。整个过程可通过显微镜观察， 还可同时由电视摄象监视器观察和进行照相记录

2.4、诱导细胞融合的方法有哪些

(1)物理融合的机制

20世纪80年代发明了电融合技术。此方法是先将两种原生质体以适当的比例制成细胞悬液，将其滴入电融合小室中，给小室两极以交变电流，使原生质体沿电场方向聚集成串珠状，接着给以瞬间高强度的电脉冲，使原生质体膜产生局部破损而融合。

(2)化学融合的机制

现通常使用聚乙二醇（PEG）作为融合剂。PEG可以破环细胞间相互排斥的表面作用力，从而使相邻细胞聚集而促进融合。另外，化学融合方法还有高pH高Ca2+法，其基本原理是中和原生质体表面所带电荷，使原生质体的质膜紧密接触，从而有利于质膜的接触融合。

(3)灭火病毒诱导的细胞融合的机制

此方法适用于动物细胞的融合。通常使用灭火的仙台病毒。利用灭火的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。在诱导细胞发生融合前，必须先用紫外线将病毒灭火，再稀释到一定浓度后加入到细胞悬液中诱导细胞融合。

3.植物细胞融合有哪些方法

细胞膜打开。

化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用， 但是并不破坏这些病原体的抗原结构

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这里的病毒肯定不会死亡的， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞发生融合，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合.，去掉作用因素之后.

灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力.，称诱发融合..只是灭活， 但是保留了他能够使细胞融合的特性.

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异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，质膜恢复原有的有序结构灭活病毒诱导细胞融合的原理是， 使细胞相互凝聚

4.细胞融合的融合方法

同种细胞在培养时2个靠在一起的细胞自发合并，称自发融合；异种间的细胞必须经诱导剂处理才能融合，称诱发融合。

仙台病毒法融合

①两种细胞在一起培养，加入病毒，在4℃条件下病毒附着在细胞

膜上。并使两细胞相互凝聚；

②在37℃中，病毒与细胞膜发生反应，细胞膜受到破环，此时需

要Ca2+和Mg2+，最适PH为8.0一8.2;

②细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需Ca2+和ATP;

④融合成巨大细胞，仍需ATP。

聚乙二醇（PEG）法

聚乙二醇（PEG）结构为：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，分子量大于200小于6000者均可用作细胞融合剂。PEG经高压灭菌后，与温热的Engle氏液混合。一般选用分子量为4,000，常用浓度为50%,pH8.0~pH8.2（用10%NaHCO3调整），分子量小的PEG，融合效应差，又有毒性，分子量过大，则粘性太大，不易操作。

电融合法

在直流电脉冲的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位发生改变，使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。

优点：融合率高、重复性强、对细胞伤害小；

装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像观察融合过程；

免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。

离心振动

物理方法之一，使用离心机等机器实现细胞之间的融合。