核酸中的有机无机磷酸——→无机磷酸+钼酸——→磷钼酸+还原剂(抗坏血酸等)——→钼兰
钼兰的最大吸收波长在660nm,在一定浓度范围内,溶液的吸收值与无机磷的含量成正比。该法测得的是总磷量,需减去无机磷的含量才是核酸的含磷量。
(二)定糖法
核酸中的戊糖可在浓盐酸或浓硫酸作用下脱水生成醛类化合物,醛类化合物可与某些成色剂缩合成有色化合物,可用比色法或分光光度法测定其溶液中的吸收值,在一定浓度范围内,溶液的吸收值与核酸的含量成正比。
1、核糖的测定
生成的绿色化合物在λ=670nm处有最大的吸收值。
2、脱氧核糖的测定
DNA中的脱氧核糖可在浓硫酸作用下脱水生成ω-羟基-γ-酮戊酸,该化合物可与二苯胺生成兰色化合物,在λ=595nm处有最大吸收值。
(三)紫外吸收法
根据核酸分子中的嘌呤环和嘧啶环在λ=260nm处有最大吸收值,可采用紫外分光光度法测定核酸的含量。
核酸定量常用方法及原理如下: 1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量。
2、定P法:核酸中P含量约为9.5%,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。
根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。
核酸定量常用方法及原理如下: 1、光吸收法:核酸中碱基共轭结构在近紫外光波长260nm处有最大吸收,吸收强度与核酸浓度成正比,因此可以用于核酸定量。
2、定P法:核酸中P含量约为9.5%,因此可以通过测定样品中的有机P量来进行核酸定量。核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。
核酸广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸,其化学组成、核苷酸排列顺序等不同。
根据化学组成不同,核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。
核酸检测采用咽拭子检测,有口咽拭子采样和鼻咽拭子采样两种方式。
口咽拭子采样就是在咽喉部位用棉签涂擦,刷取咽喉部位上皮细胞的检测。受检测者只要放松心情,张口发出“啊——”的声音就可以了,检测过程并没有创伤风险,是非常安全的检测。
检测时可能会有恶心、想要呕吐的不适感觉,不过这些不适症状通常只需要半分钟到两分钟左右就可以完全缓解了。鼻咽拭子采样是将一根细棉签深入鼻孔,从下鼻道深入抵达鼻咽后壁,然后捻转棉签取样。
棉签进入鼻腔的深度约为鼻尖到耳垂的距离。扩展资料:核酸检测相关知识:核酸检测是检测病毒的方法,它可以更早发现感染。
现在临床中对乙肝、丙肝、艾滋病都开展了核酸检测,可以在抗体产生前检测到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通过咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸检测来判断是否感染,以及推测是否具有传染性。
季节性流感、禽流感、冠状病毒感染等通过咽拭子检测可以方便地判断出上呼吸道是否存在病毒成份,从而判断被检测者是否属于感染者。新冠病毒的核酸检测已经是比较成熟的检测方法了,只要在咽喉部位擦拭几秒钟就可以采集到标本。
通过分析判断是否有新冠病毒的核酸成分,可以尽早发现感染者,甚至在感染者出现症状前就可以检测到阳性。感染者经过隔离治疗后咽拭子检测阴性说明病毒已经清除,不具有传染性了。
目前两次咽拭子核酸检测阴性是确诊病例和无症状感染者解除隔离的标准之一。参考资料来源:人民网-核酸检测究竟是怎么回事。
去百度文库,查看完整内容>内容来自用户:孤墨阳核酸定量的常用方法、原理、优缺点等。
紫外分光光度法:利用核酸中的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,在紫外光的照射下在260nm处有最大吸收峰的原理对核酸进行定量和定性的方法。是实验室内较为常用的方法。
优点:操作简单,设备要求低。缺点:灵敏度不够高,只能测定总核酸量,不能区分核算种类;易受样品中其他杂质的干扰(如pH值、残留的提取剂等)。
荧光染料法:基于荧光染料与核酸分子结合,发出的荧光信号强度与结合的核酸分子数成正比的原理设计的。常用的荧光染料有嗅化乙锭、SYBR系列染料等。
优点:灵敏度高,所需样品量少,可重复性高。缺点:染料一般都含有较高毒性,检测结果受染料与核酸的结合率影响。
实时荧光定量PCR法:在反应体系内加入荧光基团,通过荧光基团发出荧光信号经积累来实时检测PCR的反应过程,最后通过相对定量或者绝对定量的方法对未知浓度的核酸进行定量分析。常用的检测方法有TaqMan探针和荧光染料两种。
TaqMan探针法:利用Taqman酶在特异性引物上增加一条荧光双标记的探针,分别标记有荧光信号基团R和淬灭基团Q,当二者都存在的时候R基团受Q基团影响不发出荧光信号,而在PCR反应过程中,聚合酶将探针的碱基水解,R与Q基团分离,R基团发出荧光信号,模板每扩增一次,就产生一次荧光信号,通过对荧光信号的检测和绘制荧光信号曲线,与标准曲线对比分析,可对核酸进行定量。优点是特异性强,缺点是探针序列设计时需要强特异。
去百度文库,查看完整内容>
内容来自用户:孤墨阳
核酸定量的常用方法、原理、优缺点等。
紫外分光光度法:利用核酸中的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键,在紫外光的照射下在260nm处有最大吸收峰的原理对核酸进行定量和定性的方法。是实验室内较为常用的方法。
优点:操作简单,设备要求低。
缺点:灵敏度不够高,只能测定总核酸量,不能区分核算种类;易受样品中其他杂质的干扰(如pH值、残留的提取剂等)。
荧光染料法:基于荧光染料与核酸分子结合,发出的荧光信号强度与结合的核酸分子数成正比的原理设计的。常用的荧光染料有嗅化乙锭、SYBR系列染料等。
优点:灵敏度高,所需样品量少,可重复性高。
缺点:染料一般都含有较高毒性,检测结果受染料与核酸的结合率影响。
实时荧光定量PCR法:
在反应体系内加入荧光基团,通过荧光基团发出荧光信号经积累来实时检测PCR的反应过程,最后通过相对定量或者绝对定量的方法对未知浓度的核酸进行定量分析。常用的检测方法有TaqMan探针和荧光染料两种。
TaqMan探针法:利用Taqman酶在特异性引物上增加一条荧光双标记的探针,分别标记有荧光信号基团R和淬灭基团Q,当二者都存在的时候R基团受Q基团影响不发出荧光信号,而在PCR反应过程中,聚合酶将探针的碱基水解,R与Q基团分离,R基团发出荧光信号,模板每扩增一次,就产生一次荧光信号,通过对荧光信号的检测和绘制荧光信号曲线,与标准曲线对比分析,可对核酸进行定量。优点是特异性强,缺点是探针序列设计时需要强特异
核酸的定量测定——定磷法 [原理] 磷的测定方法很多,Fiske-Subbarow定磷法是一经典的但至今仍被经常采用的方法,它具有灵敏、简便的特点。
各种含磷有机物经硫酸或过氯酸水解,使有机磷消化成为无机磷。无机磷在酸性条件下,与钼酸盐(常用钼酸铵或钼酸钠)反应生成磷钼酸盐络合物。
用还原剂处理,磷钼酸盐络合物被还原生成钼蓝,在660nm处有最大光吸收峰。在一定浓度范围内,颜色的深浅与磷含量成正比关系。
因此可应用分光光度法进行磷的定量测定。 生物帮上面相关的专题资料的, 生物问答 /。
声明:本网站尊重并保护知识产权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果我们转载的作品侵犯了您的权利,请在一个月内通知我们,我们会及时删除。
蜀ICP备2020033479号-4 Copyright © 2016 学习鸟. 页面生成时间:3.482秒