细菌学检验方法(细菌学检验方法)

1.细菌学有哪些检验方法

细菌学的检验方法有： 1.涂片镜检 将病料涂于清洁无油污的载玻片上，干燥后在酒精灯火焰上固 定，选用单染色法（如美蓝染色法）、革兰氏染色法、抗酸染色法或其他特殊染色法染色镜检，根据所观察到的细 菌形态特征，作出初步诊断或确定进一步检验的步骤。

2.分离培养 根据所怀疑传染病病原菌的特点，将病料接种于适宜的细菌培 养基上，在一定温度（常为37°C）下进行培养，获得纯 培养苗后，再用特殊的培养基培养，进行细菌的形态学、培养特 征、生化特性、致病力和抗原特性鉴定。 3.动物实验 用灭菌生理盐水将病料做成1 : 10悬液，或利用分离培养获得的细菌液感染实验动物，如小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔等。

感染方法可用皮下、肌内、腹腔、静脉或脑内注射。感染后按常规隔离 伺养管理，注意观察，有时还需对某种实验动物测量体温；如有死亡，应立即进行剖检及细菌学检查。

2.细菌学检验基本技术有哪些

1.涂片镜检

将病料涂于清洁无油污的载玻片上，干燥后在酒精灯火焰上固 定，选用单染色法（如美蓝染色法）、革兰氏染色法、抗酸染色法或其他特殊染色法染色镜检，根据所观察到的细 菌形态特征，作出初步诊断或确定进一步检验的步骤。

2.分离培养

根据所怀疑传染病病原菌的特点，将病料接种于适宜的细菌培 养基上，在一定温度（常为37°C）下进行培养，获得纯 培养苗后，再用特殊的培养基培养，进行细菌的形态学、培养特 征、生化特性、致病力和抗原特性鉴定。

3.动物实验

用灭菌生理盐水将病料做成1 : 10悬液，或利用分离培养获得的细菌液感染实验动物，如小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔等。感染方法可用皮下、肌内、腹腔、静脉或脑内注射。感染后按常规隔离 伺养管理，注意观察，有时还需对某种实验动物测量体温；如有死亡，应立即进行剖检及细菌学检查。

3.细菌鉴定办法有哪些,详细些哦~~

一 淀粉水解试验 （一）实验原理 细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。

胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。

水解过程可通过底物的变化来证明，如细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH，其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。（二）实验方法 将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右，以无菌操作制成平板。

取18-24h的纯培养物点于平板上，每皿可点种3-5个菌株，适温培养2-4d，形成菌落后，在平板上滴加卢戈氏碘液，以铺满菌落周围为度，平板成蓝色。如果菌落周围有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，实验为阳性，否则为阴性。

透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力。（三）实验试剂的配制 肉汤蛋白胨琼脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL,pH7.2。

淀粉培养基制法：在肉汤蛋白胨琼脂中添加0.2%的可溶性淀粉，校正pH值至7.6，分装三角瓶，121℃ 20min灭菌备用。卢戈氏（Lugol）碘液：碘片1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，混匀，定容。

二 糖发酵试验（一）实验原理 单糖发酵是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓度为0.75-1%。并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37℃培养18-24小时，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。

（二）实验材料 1.菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。 2.培养基：葡萄糖发酵管，乳糖发酵管等。

（三）实验方法1.将伤寒杆菌，大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。 2.置37℃孵箱培养18-24小时。

3.观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸，所以培养基中pH下降到7.0以下，在酚红指示剂的显示下，培养基颜色由红变黄。产酸者以“+”表示，如果同时产生气体，则培养基中小倒管内有气泡出现，此乃产酸又产气，以“⊕”表示，不分解，则指示剂不变色，用“-”表示。

（四）实验结果 伤寒杆菌 大肠杆菌 葡萄糖 + ⊕ 乳 糖 - ⊕ （五）实验试剂的配制1.单糖发酵管的制备： 成分：蛋白胨水培养基 100ml ,0.2%酚红 1ml ，所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g 制法： （1）将上述成分溶化，混匀分装于内含有倒置小玻璃管的小试管中，每管约2ml，加塞。 （2）小倒管排气，灭菌（8-10磅，20-30分钟），贮存备用。

用途：供单糖发酵试验用。 2.0.2%酚红配制法 酚红（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ，蒸馏水 92ml 将酚红入研钵徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨，再补足蒸馏水即成。

若需长时间保存，可高压灭菌后贮存备用。 三 甲基红（M.R）试验（一）实验原理 某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基pH值降至4.5以下，加入甲基红指示剂呈红色，此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等，则培养基的酸碱度仍在pH 6.2以上，加入甲基红指示剂呈现黄色，为阴性反应。

（二）实验材料1. 菌种：大肠杆菌，产气杆菌18-24h琼脂斜面培养物。 2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基。

3. 试剂：甲基红试剂。 （三）实验方法1. 分别将大肠杆菌，产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白胨水培养基中。

2. 置37℃培养2-3天取出，分别滴加甲基红试剂2-3滴，混匀，观察结果。 （四）实验结果 大肠杆菌：+，产气杆菌：-。

（五）实验试剂的配制1.甲基红试剂的配制 甲基红 0.04g, 95%酒精 60ml ， 蒸馏水 40ml 。先使甲基红溶解于酒精中，再加入蒸馏水，混合，摇匀即成。

2.葡萄糖蛋白胨水培养物 成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g 制法： （1）将上述成分溶解于蒸馏水中。 （2）调节pH至7.6，用滤纸过滤除渣。

（3）分装中试管，每管约3-4ml，灭菌后备用。 用途：供甲基红及V-P试验用。

四 产吲哚（indole）试验（一）实验原理 某些细菌如大肠杆菌，变形杆菌等具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培养基中的色氨酸，产生靛基质（无色吲哚），再与欧立希试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应，形成红色化合物—玫瑰吲哚，即为阳性反应。 （二）实验材料1. 菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。

2. 培养基：蛋白胨水培养基。 3. 试剂，欧立希（Ehrlich）试剂（对二甲基氨基苯甲醛） （三）实验方法1. 分别将大肠杆菌，伤寒杆菌接种于两支蛋白胨水培养基中。

2. 置37℃培养2-3天后，每管沿管壁各加欧立希试剂0.5-1ml于培养液面上，待1-2分钟后观察结果：在交界面出现玫瑰红色环即为吲哚试验阳性，无红色环即为阴性。 （四）实验结果 大肠杆菌：+ ；伤寒杆菌：- 。

（五）实验试剂的配制1.蛋白胨水培养基的制备 成分：蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml 制法： （1）先用少量蒸馏水将蛋白胨和氯化钠相混合溶解，再加足蒸馏水量。 。

4.病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

细菌 [what]什么是细菌？细菌（英文：germs;bacteria）隶属生物学一类，是在自然界分布最广、个体数量最多的有机体，是大自然物质循环的主要参与者。

细菌主要由细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等部分构成，有的细菌还有夹膜、鞭毛、菌毛等特殊结构。绝大多数细菌的直径大小在0.5~5μm之间。

可根据形状分为三类，即：球菌、杆菌和螺旋菌（包括弧形菌）。 还有一种利用细菌的生活方式来分类，即可分为两大类：腐生生活与寄生生活。

（一）细胞壁 细胞壁厚度因细菌不同而异，一般为15-30nm。主要成分是肽聚糖，由n-乙酰葡糖胺和n-乙酰胞壁酸构成双糖单元，以β（1-4）糖苷键连接成大分子。

n-乙酰胞壁酸分子上有四肽侧链，相邻聚糖纤维之间的短肽通过肽桥（革兰氏阳性菌）或肽键（革兰氏阴性菌）桥接起来，形成了肽聚糖片层，像胶合板一样，粘合成多层。 肽聚糖中的多糖链在各物种中都一样，而横向短肽链却有种间差异。

革兰氏阳性菌细胞壁厚约20~80nm，有15-50层肽聚糖片层，每层厚1nm，含20-40%的磷壁酸（teichoic acid），有的还具有少量蛋白质。革兰氏阴性菌细胞壁厚约10nm，仅2-3层肽聚糖，其他成分较为复杂，由外向内依次为脂多糖、细菌外膜和脂蛋白。

此外，外膜与细胞之间还有间隙。 肽聚糖是革兰阳性菌细胞壁的主要成分，凡能破坏肽聚糖结构或抑制其合成的物质，都有抑菌或杀菌作用。

如溶菌酶是n-乙酰胞壁酸酶，青霉素抑制转肽酶的活性，抑制肽桥形成。 细菌细胞壁的功能包括：保持细胞外形；抑制机械和渗透损伤（革兰氏阳性菌的细胞壁能耐受20kg/cm2的压力）；介导细胞间相互作用（侵入宿主）；防止大分子入侵；协助细胞运动和分裂。

脱壁的细胞称为细菌原生质体（bacterial protoplast）或球状体（spheroplast，因脱壁不完全），脱壁后的细菌原生质体，生存和活动能力大大降低。 （二）细胞膜 是典型的单位膜结构，厚约8~10nm，外侧紧贴细胞壁，某些革兰氏阴性菌还具有细胞外膜。

通常不形成内膜系统，除核糖体外，没有其它类似真核细胞的细胞器，呼吸和光合作用的电子传递链位于细胞膜上。某些行光合作用的原核生物（蓝细菌和紫细菌），质膜内褶形成结合有色素的内膜，与捕光反应有关。

某些革兰氏阳性细菌质膜内褶形成小管状结构，称为中膜体（mesosome）或间体（图3-11），中膜体扩大了细胞膜的表面积，提高了代谢效率，有拟线粒体（chondroid）之称，此外还可能与dna的复制有关。 （三）细胞质与核质体 细菌和其它原核生物一样，没有核膜，dna集中在细胞质中的低电子密度区，称核区或核质体（nuclear body）。

细菌一般具有1-4个核质体，多的可达20余个。核质体是环状的双链dna分子，所含的遗传信息量可编码2000~3000种蛋白质，空间构建十分精简，没有内含子。

由于没有核膜，因此dna的复制、rna的转录与蛋白的质合成可同时进行，而不像真核细胞那样这些生化反应在时间和空间上是严格分隔开来的。 每个细菌细胞约含5000~50000个核糖体，部分附着在细胞膜内侧，大部分游离于细胞质中。

细菌核糖体的沉降系数为70s，由大亚单位（50s）与小亚单位（30s）组成，大亚单位含有23srrna,5srrna与30多种蛋白质，小亚单位含有16srrna与20多种蛋白质。30s的小亚单位对四环素与链霉素很敏感，50s的大亚单位对红霉素与氯霉素很敏感。

细菌核区dna以外的，可进行自主复制的遗传因子，称为质粒（plasmid）。质粒是裸露的环状双链dna分子，所含遗传信息量为2~200个基因，能进行自我复制，有时能整合到核dna中去。

质粒dna在遗传工程研究中很重要，常用作基因重组与基因转移的载体。 胞质颗粒是细胞质中的颗粒，起暂时贮存营养物质的作用，包括多糖、脂类、多磷酸盐等。

（四）其他结构 许多细菌的最外表还覆盖着一层多糖类物质，边界明显的称为荚膜（capsule），如肺炎球菌，边界不明显的称为粘液层（slime layer），如葡萄球菌。荚膜对细菌的生存具有重要意义，细菌不仅可利用荚膜抵御不良环境；保护自身不受白细胞吞噬；而且能有选择地粘附到特定细胞的表面上，表现出对靶细胞的专一攻击能力。

例如，伤寒沙门杆菌能专一性地侵犯肠道淋巴组织。细菌荚膜的纤丝还能把细菌分泌的消化酶贮存起来，以备攻击靶细胞之用。

鞭毛是某些细菌的运动器官，由一种称为鞭毛蛋白（flagellin）的弹性蛋白构成，结构上不同于真核生物的鞭毛。细菌可以通过调整鞭毛旋转的方向（顺和逆时针）来改变运动状态。

菌毛是菌体表面极其的蛋白纤细，须用电镜观察。特点是：细、短、直、硬、多，菌毛与细菌运动无关，根据形态、结构和功能，可分为普通菌毛和性菌毛两类。

前者与细菌吸附和侵染宿主有关，后者为中空管子，与传递遗传物质有关。 （五）繁殖 细菌一二分裂的方式繁殖，某些细菌处于不利的环境，或耗尽营养时，形成内生孢子，又称芽孢，是对不良环境有强抵抗力的休眠体，由于芽胞在细菌细胞内形成，故常称为内生孢子。

芽孢的生命力非常顽强，有些湖底沉积土中的芽抱杆茵经500-1000年后仍有活力，肉毒梭菌的芽孢在ph 7.0时能耐受100℃煮沸5-9.5小。

5.细菌检测最简单的方法

原发布者：龙源期刊网

目前有哪种微生物测试方法能够在6~8个小时内显示食品和食品生产环境清洁度的微生物水平？食品和饮料生产公司的答案是令人失望的：没有！细菌总数、大肠菌群以及大肠杆菌平板计数通常可以对食品样品以及表面处理环境的微生物水平进行评估，然而检测结果需要在24~72小时之后获得。而采用显色培养基进行的特殊细菌测试，获得检测结果的时间会更长，如果采用外部实验室的方法，那么从样品收集到获得检测结果要在3~5天。尽管快速自动的检测系统是可行的，但是这些检测方法也需要一天以上的时间，且对于大多数的公司来讲检测费用较为昂贵，检测方法也较为复杂。相比之下，食品公司一般会采用外部实验室进行微生物检测。受方法的科学局限、灵敏度的约束、分析的复杂程度以及高昂费用等因素的影响，尽管面对需要尽快获得产品检测结果的情况，但大多数的食品饮料生产经营者也不得不采用延迟获得检测结果的技术对产品进行检测。目前研发出一种被AOAC（美国分析化学家协会）认证的，操作十分简单，能够在当天获得产品指示微生物如大肠菌群、大肠杆菌以及总需氧微生物的检测结果的新的检测平台，这种新型的检测平台被称为

6.细菌形态学检查常用的方法有什么

细菌形态学检查方法：常用染色方法

1.美蓝染色法

在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1一2分钟，水洗，干后镜检，结果是细菌呈蓝色。

2.稀释石炭酸复红染色法

染色方法同美蓝染色法，结果是细菌呈红色。

3.革兰（Gram）氏染色法

(1)在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸按结晶紫染色液，染色2一3分钟，水洗。

(2)加革兰氏碘液于抹片上媒染1一2分钟，水洗。

(3)加95%酒精于抹片上脱色，约30秒至1分钟，水洗。

(4)加稀释石炭酸复红（或沙黄水溶液）复染50一60秒钟，水洗。干后镜检。结果是细菌染成蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，染成红色的称为革兰氏阴性细菌。

7.便常规的细菌学检查方法是什么

大便是由人体消化后形成的废物，是由食物经过食道、胃、小肠、大肠后产生的代谢废物。一般而言，大便的颜色、性状对疾病的诊断很有帮助，而显微镜检查则对确定疾病的性质较为重要。由于人体的消化系统的复杂以及宝宝消化道的相对脆弱，所以，化验大便可以知道消化管道上某一部份的，甚至某特定部份的机能上或器质上的病变，作为判断宝宝的消化道疾病重要手段。

注意事项是用竹签或木片采取约蚕豆大一块新鲜粪便，装入专门留取标本的纸盒内，写上姓名，立即送检；如大便有脓血时，应留取脓血部分；水样便要用容器留送；检查寄生虫时要在粪便各部分都留一点。

正常人的粪便为黄褐色成形软便.婴儿粪便多呈淡黄或者黄色。正常婴幼儿多为稀糊状，无红细胞和脓细胞。

便常规的细菌学检查：肠道致病菌检查，主要是靠培养分离与鉴定，但有时也可以直接涂片、镜检。

霍乱弧菌：用悬滴法可观察其特有形态与运动方式。

伪膜性肠炎：涂片、染色后查找葡萄球菌、念珠菌或梭形菌。

肠结核：涂片、耐酸染色查找结核分枝杆菌。

念珠菌性肠炎：涂片、镜检可找到酵母样芽生孢子和假菌丝。

某些腹泻患者：涂片可见大量八叠球菌及人体酵母菌，后者在形态上易与白细胞或原虫包囊混淆，可用蒸馏水代替生理盐水作粪便涂片，此时人体酵母功很快破裂消失，而白细胞或原虫包囊则不易破坏。

8.常见的尿细菌学检查方法有哪些

尿细菌学检查对诊断尿路感染具有重要价值。

主要有以下两种 方法。 （1）尿涂片找细菌。

尿路细菌感染时尿中含有大量细菌，尿液 涂片镜检易找到细菌。每高倍视野细菌数少于10个或未找到，提示 中段尿培养阴性或菌落数低于10 V ml。

如果细菌数为15〜30个/高 倍视野，中段尿培养菌落数常大于105/ml。 据中山医科大学叶任高 教授经验，其可靠率为90%以上。

并认为，即使已开始使用抗生素的病例，尿培养阴性，尿沉渣革兰染色找细菌仍有可能找到，这样 就可弥补在应用抗生素的情况下尿细菌培养阴性的缺点。另外，应 用革兰染色涂片找细菌可以初步确定尿路感染是阳性球菌或阴性杆 菌，作为使用抗菌药物的参考。

（2）尿液细菌培养。正常人尿内有一定数量的细菌，尿道口周 围亦有大量细菌。

正常人尿道口及阴道存在以下细菌：表皮葡萄球菌、链球菌、枯草杆菌、假白喉棒状杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、乳酸杆菌、卡他布兰汉氏菌及耻垢分枝杆菌等。外阴冲洗不净，细菌常混人尿中， 但细菌数小于103/ml。

尿细菌培养的目的主要是运用中段尿培养菌 落计数的方法以鉴别是否为尿路感染。 若尿菌落数大于10 V ml为感染，准确率约80%；细菌数小于 103/ml或有多种细菌生长，为污染所致，无临床意义。

但值得注 意的是球菌，特别是粪球菌及肠球菌繁殖缓慢，其尿菌落数若为 103 ~ 104/ml之间，即有诊断价值；细菌数在103 ~105/ml者不能排 除感染，考虑是否因应用抗生素、清洗消毒剂混入、尿过频、细菌 生长缓慢等因素所致，必要时复查。 不论中段尿，还是导尿，都不可避免前尿道细菌的污染。

因此， 做细菌培养而不加含菌量计数，结果很不可靠。但在常规消毒下做 膀胱穿刺取尿作定性却很可靠，只要培养出细菌，不论细菌数多少，均认为是感染，不会出现假阳性。

尿细菌定量培养结果很可靠，但 遇到下列情况时需做膀胱穿刺尿培养：没有条件做尿含菌量计数的 单位，在诊断上有闲难时；高度怀疑有尿路感染而尿含菌量却低； 反复尿定量细菌培养结果均可疑者；要进一步确定是否有混合感染 存在；可疑的厌氧菌所致者。 以上情况均考虑做膀胱穿刺尿培养。

方法如下：鼓励患者饮水，使膀胱充盈至耻骨联合以上，扪及膀胱 后即可穿刺。先刹毛、消毒，用9号10 cm长的针头连接注射器，在 耻骨联合上方正中线穿入皮肤，然后猛力穿入膀胱，将尿液收集于 无菌试管送检。

拔针后用无菌纱布覆盖。 本法是避免污染的最好方法。

缺点是患者有一定的痛苦。 急性泌尿系感染多为单种细菌，大肠杆菌占60% ~ 80%，余为 金黄色葡萄球菌、变形杆菌、粪肠球菌；慢性感染常混合其他细菌； 绿脓杆菌多在手术或插管后引起感染。

9.卫生细菌学检查标准

卫生细菌学检查

大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。

细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。我国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。

大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。我国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。