分离普通微生物有哪些(细菌的纯种分离和接种技术注意事项有哪些)

1.细菌的纯种分离和接种技术注意事项有哪些

细菌的纯种分离和接种技术中，需要注意的事项有：

1）稀释度的问题

纯种分离的时候，无非是把菌液稀释一定梯度后，涂布在诸如LB培养基上。如果没有稀释好，就会导致细菌长得太密，或者是细菌根本不长。最优的稀释梯度是最后在平板上的菌落数在30至300之间。此时，能清楚地看清菌落的形态，便于挑取单菌落；

2）杂菌污染的问题

因为用于接种的一般都是营养丰富的有机培养基，这种培养基适合任何细菌生长。在操作过程中，空气和桌面上都会有大量看不见的细菌潜在。在分离和接种前，所有用到的器具和培养基必须在121摄氏度下灭菌20分钟至30分钟。在倒平板时，最好在培养基还是热的时候倒，以减少杂菌感染。所有的操作最好在超净工作台上完成。若没有超净工作台，那就拿两个酒精灯点燃，并用酒精擦拭桌面，在两个酒精灯之间操作。

综上，想要较好地分离和接种细菌，操作人员必须完全保证杂菌的感染，操作熟练，在温度和洁净度上做到最严格。

2.进行菌种分离前需要做哪些准备工作?

具体如下：（1） 无菌室和分离用器具的灭菌和消毒分离菌种的操作过 程，应该在很清洁的条件下严格按照无菌操作技术进行，无菌室、无菌箱或洁净工作台都应保持清洁，必要时可用0。

1%的升汞溶液 或70%的乙醇擦拭工作台。微生物一般都是附着在尘埃上、悬浮 于空气中，可采用在室内喷雾或煮沸水的方法，使空气中水汽饱和，尘埃与水滴同时降落，除去空气中的微生物。

分离时所用的培养皿、刀剪、接种环等用具及工作人员的工作服都应进行无菌处理，操作时不能在操作间走动，防止带来杂菌。（2） 消毒液的配制① 无菌水：无菌水即为高压灭菌后的自来水。

将适量自来水装人三角瓶中，塞好棉塞，然后进行髙压灭菌，水装人量不宜太多，防止高压灭菌时弄湿棉塞。 无菌水不应保存时间太久，防止污染。

② 常用的消毒液有以下几种：0。1%升汞溶液、漂白粉、70%的酒精溶液。

此外，5%福尔马林、3%过氧化氢、0。1%氰化汞、2%高锰酸钾、0。

1%硝酸银等都可用作表面消毒，处理时间和浓度因材料不同而异，处理后都应用无菌水冲洗。 （3） 排除细菌污染细菌污染是分离真菌的大敌，目前抑制细菌生长有效的方法是在培养基中加人适当的抗生素。

加金霉素（30微克/毫升）可抑制多数细菌生长，加青霉素（2微克/毫升）可抑制革兰阳性细菌生长，加多黏菌素B(0。5微克/毫升)可抑制革兰阴性细菌生长，加链霉素40微克/毫升和氯霉素50微克/毫升可以抑制大部分细菌生长，除气霉素可在制作培养基时灭菌前加人外，其他抗生素都应在培养基灭菌后冷却到45°C左右时再加人。

此外，可调节培养基的pH值，酸性培养基对大部分细菌都有抑制作用，而并不影响真菌生长。

3.畜禽细菌分离培养需要注意什么

1） 严格的无菌操作分离培养时的无菌操作包括两个方面： 一是采取待检材料时的无菌操作，不论任何待检材料（包括动物的 组织、体液、分泌物、渗出物、排泄物、词料或饮水等）必须在无 菌操作下，用灭菌的器械采取，样品放入灭菌的容器中待检。

二是 接种培养基时的无菌操作，接种用的器械如接种环、棉棒或其他用 具，在取材料接种之前必须予以灭菌，接种培养基时，要尽一切可 能防止外界微生物的进人。 2） 创造适合细菌生长发育的条件一是选择适宜的培养基， 一般尽可能地多用几种培养基，包括普通培养基和特殊培养基（如 含有特殊营养物质的培养基、适于厌氧菌生长的培养基等）。

二是 要考虑细菌所需的大气条件。对于性质不明的细菌材料最好多接种 几份培养基，分别放在普通大气、无氧环境内或含有5%〜10%二 氧化碳的容器中培养。

三是要考虑培养温度和时间。一般病原菌放 在37度下培养即可，经24〜72小时培养后大多数病原菌都可以生 长出来，少数须培养较长时间（1〜4周）后可见其生长，但要注意 防止培养基变干。