测定rna浓度的方法(如何测量RNA浓度)

1.如何测量RNA浓度

1、超微量分光光度计测260nm吸收值计算。

可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。

2、也可以用RNA胶（凝胶成像）检测。例如：原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢，因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。

扩展资料

1、RNA的功能是：

(1)具有肽酰转移酶的活性。

(2)为tRNA提供结合位点。

(3)在蛋白质合成起始时，参与同mRNA选择性的结合，在肽链的延伸中与mRNA结合。

2、原核生物的rRNA分三类：5SrRNA、16SrRNA和23SrRNA。

真核生物的rRNA分四类：5SrRNA、5.8SrRNA、18SrRNA和28SrRNA。

S为大分子物质在超速离心沉降中的一个物理学单位，可间接反映分子量的大小。原核生物和真核生物的核糖体均由大、小两种亚基组成。

3、凝胶成像对DNA或RNA胶 进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器，凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。

参考资料来源：百度百科—核糖体RNA

参考资料来源：百度百科—超微量分光光度计

参考资料来源：百度百科—凝胶成像

参考资料来源：百度百科—RNA GEL SHIFT

2.如何测量RNA的纯度和含量

1. 相关概念

RNA质检参数OD260/OD280、OD260/OD230的意义。

260、280、320、230nm下的吸光度分别代表了核酸、蛋白质、盐浓度和有机溶剂的值。

A230： 测定其它碳源物质，如酚，糖类等。

A260：核酸的吸收峰测，测RNA,DNA，引物等的浓度用的。

A280：蛋白质的吸收峰。

一般的，我们只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范围内时，我们认为 RNA中蛋白的污染是可以容忍的，不过要注意，当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时，R 值可能会大于 2（一般应该是<2.2的）。当R < 1.8时，溶液中蛋白的污染比较明显，可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当R > 2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。纯RNA的OD260/OD280的比值为2.0。

2. RNA质量检验

RNA样品的品质检测一般分为总量，纯度与完整性三大项。

总量：微量分光光度计测260nm吸收值计算。

纯度：微量分光光度计测260nm/230nm吸收值的比值，用于评估有机溶剂残留；260nm/280nm吸收值的比值，用于评估蛋白质污染比例。

完整性：以Agilent Bioanalyzer进行毛细管电泳（capillary electrophoresis），并以软件的RIN(RNA Integrity Number)分数评估，10为RNA完整性最好，0为最差。

l RNA纯度

RNA在纯化过程中容易受到DNA、蛋白质及有机溶剂的影响，这些残存物将会影响以后的操作。光谱分析（NANODROP）利用物质对不同波长光的吸收度的不同，可以鉴别出溶液纯度及浓度。RNA溶液的A260/A280的比值是一种RNA纯度检测方法，比值范围一般为1.8-2.1。各项实验对RNA纯度要求不一，比如即使比值超出这个范围，RNA样品也一样可以用于一些普通实验中，如Northern杂交、RT-PCR、荧光定量PCR和RNA酶保护等实验。

3.酵母rna含量测定的方法有几种

酵母rna含量测定的方法有几种

(1) 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。

(2) 将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。

(3) 静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。

(4) 计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格（即100小格）的酵母菌数。如果是25中格计数板。除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数（即80小格）。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

(5) 凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复分数2-3次（每次数值不应招差过大，否则应重新操作），取其平均值，按下述公式计算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。 每毫升菌液含菌数=每小格酵母细胞数*4000*1000*稀释倍数 。

(6) 血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或吹风机吹干。

4.如何确定RNA质量

检测RNA溶液的吸光度

280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时，R值可能会大于2（一般应该是〈2.2的）。当R〈1.8时，溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R〉2.2时，说明RNA已经水解成单核酸了。

生物帮上面有详细的介绍， 细胞生物学实验技术，细胞培养实验技术，细胞侵袭。