直接法 1.检查抗原法 这是最早的方法,用已知特异性抗体与荧光素结合,制成荧光特异性抗体,直接与细胞或组织中相应抗原结合,在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。
此法很特异和简便,但一种荧光抗体只能检查一种抗原,敏感性较差。 2.检查抗体法 将抗原标记上荧光素,即为荧光抗原,用此荧光抗原与细胞或组织内相应抗体反应,而将抗体定位检测出来。
生物帮上面有的, 动物细胞培养,植物细胞培养,ES细胞(胚胎干细胞)培养,细胞悬浮培养,贴壁细胞培养。
第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下:
1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的,经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异,所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞;
2、通常采用有限稀释克隆细胞的方法,将杂交瘤细胞多倍稀释,接种在多孔的细胞培养板上,使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞(理论上30%的孔中细胞数为0时,才能保证有些孔中是单个细胞),再由这些单细胞克隆生长,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。
拓展资料:
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体,称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。
参考资料:单克隆抗体百度百科:网页链接
检测自身抗体的方法有多种,包括间接免疫荧光法、颗粒凝集法、酶联免疫吸附试验、放射免疫法、免疫双扩散法、参比对流免疫电泳法、免疫印迹法、免疫斑点法、胶体金标斑点免疫渗滤法以及速率免疫比浊法等,间接免疫荧光法即适用于检测针对原位成分也适用于可溶性成分的抗体,其余各法均适用于针对可溶性成分的抗体,可根据临床需要及医院条件去选用。
以下介绍常用的几种。 (1)间接免疫荧光法(IIF)这是进行抗核抗体、抗核仁抗体和抗胞浆抗体筛选检测的最有效方法。
在些检测系统中,以组织培养细胞和器官的冷冻片切为反应底物。 (2)免疫双扩散法(ID)免疫双扩散法过去称为“Ouchterlony试验”是最早用于鉴定系统性自身免疫性疾病中自身抗体特异性的检测系统。
在这些系统中,琼脂凝胶是血清中抗体扩散从相反方向扩散过来的抗原相遇的介质,在抗原与抗体间形成沉淀线。鉴定抗原抗体系统时需标准参照血清。
当二者相同时,两条沉淀线在琼脂凝胶上形成一条连续的沉淀线。免疫扩散中形成的沉淀线可用来鉴定如抗Sm、RNP、SS-B抗体系统及许多前述的可沉淀性抗原抗体系统。
(3)对流免疫电泳(CIE)对流免疫电泳是免疫扩散的改良试验,采用电泳以加速抗原、抗体彼此向对方移动的速度,从而仅在几小时内便可形成沉淀线,而免疫双扩散法则需1~2天的时间。在CIE中仅能检出与抗原相比为酸性等电点的抗体,但对流免疫电泳很易检出抗DNA、Sm、RNP和SS-B的自身抗体。
(4)免疫印迹法免疫印迹法(Westernblotting,WB)已广泛用于测定自身抗体。在免疫印迹法中,将抗原电泳入聚丙烯酰胺凝胶,蛋白在电泳池中移动的速度与其相对分子大小成比例。
许多核内、核仁内和胞浆抗原可根据它们在该系统中的相对移动速度进行测定。与已知分子大小蛋白带发生反应的抗体特异性可据此初步作出判断。
(5)ELISA这一抗体检测系统十分敏感,但却非常依赖于抗原制品的纯度。通常以部分纯化的组织提取物或部分纯化的重组抗原为底物。
抗体与这些抗原发生反应后,加入能结合抗体浓度的指示剂。该系统存在两个问题,一个问题是部分纯化组织提取物中含有一种以上的抗原或重组抗原,这些抗原可含有细菌产物(所检测的血清可能含有针对这些细菌产物的抗体)。
另一个问题是随着ELISA的敏感性增高,其特异性随之降低。
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