测定微生物计数的方法有很多,主要有以下几种:
1.血细胞计数法
将稀释的菌液样品滴在血细胞计数板上,在显微镜下计算4~5个中格的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再以此为依据,估算总菌数.
①此法的缺点是不能区分死菌和活菌.
②对压在小方格界线上的细菌,应当取平均值计数.
③此法可用于测定培养液中酵母菌种群数量的变化
2.稀释涂布平板法
原理:每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落.培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌.
①这一方法常用来统计样品中活菌的数目
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是当两个活多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落.因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含细菌、酵母、芽孢与孢子等的数量均可用此法测定.但不适于测定样品中丝状体微生物,例如放线菌或丝状真菌或丝状蓝细菌等的营养体等.
④此法若不培养成菌落,可通过将一定量的菌液均匀地涂布在玻片上的一定面积上,经固定染色后在显微镜下计数,这样又称涂片计数法.染色可用台盼蓝,台盼蓝能使死细胞染成蓝色,可分别计数死细胞和活细胞.
3.滤膜法
滤膜法是当样品中菌数很低时,可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器.然后将滤膜干燥、染色,并经处理使膜透明,再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的细菌数.
此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数.例如测定饮用水中大肠杆菌的数目:将已知体积的水过滤后,将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养.在该培养基上大肠杆菌的菌落呈现黑色,可根据培养基上黑色菌落的数目,计算出水样中大肠杆菌的数目.
此法也是统计样品中活菌的数目.
4.比浊法
原理是在一定范围内,菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比,即与光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助与分光光度计,在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度表示菌量.实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内,否则不准确.
5.显微镜直接计数法
在课本生物选修1生物技术实践P22中“除了上述活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法.”这里说的显微镜直接计数,我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数.再如滤膜法也一样,可以有两种情况.
另外,微生物计数法发展迅速,多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目.
微生物检验方法标准 1 食品微生物学检验 总则 GB 4789.1-2010 2 菌落总数测定 GB 4789.2-2010 3 大肠菌群计数 GB 4789.3-2010 4 沙门氏菌检验 GB 4789.4-2010 5 金黄色葡萄球菌检验 GB4789.10-2010 6 霉菌和酵母计数 GB4789.15-2010 7 乳与乳制品检验 GB4789.18-2010 8 单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB4789.30-2010 9 乳酸菌检验 GB 4789.35-2010 10 阪崎肠杆菌检验 GB4789.40-2010 11 志贺氏菌检验 GB 4789.5-2012 12 产气荚膜梭菌检验 GB4789.13-2012 13 双歧杆菌的鉴定 GB4789.34-2012 14 大肠埃希氏菌计数 GB 4789.38-2012 15 副溶血性弧菌检验 GB4789.7-2013 16 商业无菌检验 GB4789.26-2013 17培养基和试剂的质量要求 GB4789.28-2013 18沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验 GB 4789.31-2013 19 粪大肠菌群计数 GB 4789.39-2013 20 空肠弯曲菌检验 GB4789.9-2014 21 β型溶血性链球菌检验 GB4789.11-2014 22 蜡样芽孢杆菌检验 GB4789.14-2014 23小肠结肠炎耶尔森氏菌检验 GB4789.8-2016 24 肠杆菌科检验 GB4789.41-2016。
原发布者:jxc2520
食品微生物学检验菌落总数测定一、培养基和试剂1、平板计数琼脂(platecountagar,PCA)培养基成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mLpH7.0±0.2制法:将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH。分装试管或锥形瓶,121℃高压灭菌15min。2、磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g蒸馏水500mLpH7.2制法:贮存液:称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH,用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中,121℃高压灭菌15min。3、无菌生理盐水成分氯化钠8.5g蒸馏水1000mL制法:称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min。二、操作步骤样品的稀释1、固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1:10的样品匀液。2、液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量
统计菌落数目的方法有直接计数法 和间接计数法两种。
1. 直接计数法
直接计数法是将稀释的样品滴在计 数板上,盖上盖玻片,然后在显微镜下计 数4〜5个中格的细菌数,并求出每个小 格所含细菌的平均数,再按公式求出每 毫升样品中所含的细菌数。计算公式 为:每毫升原液所含细菌数=每小格平 均细菌数X400X1 000X稀释倍数。这 种方法的优点是所需设备比较简单,能 迅速得到结果,而且在计数的同时还可 以观察到所研究的微生物的形态特征; 缺点是不能区分死菌与活菌。
2. 间接计数法
在应用稀释涂布平板法计数时,首 先要将待测样品配制成均匀的系列稀释 液,尽量使微生物细胞分散开,再把稀释 液接种到平板上,进行培养观察。但值 得注意的是,统计的菌落数往往比活菌 的实际数目低,而且统计的结果一般用 菌落数而不用活菌数来表示。计算公式 为:每克样品中的菌落数= (C+V)X M,其中,C表示某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V表示涂布平板时所 用的稀释液的体积(mL),M代表稀释 倍数。
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