常见的dna与rna提取方法(DNA实验室常用的DNA提取方法)
1.DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些
提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。
一）CTAB法
CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
（二）SDS法
利用高浓度的SDS，在较高温度（55—65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的做法使蛋白质及多糖杂质沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保温，在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
以下是在提取热带水果DNA时设计的两种不同方法步骤，对比起来CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！
1、CTAB法
1） 在所需量的CTAB抽提液中加入2-巯基乙醇，使终浓度达2%(v/v)。将此溶液预热至65℃。
对于每克新鲜的叶组织大约需要4ml的2-ME/CTAB抽提液。
2） 用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷却粉碎器/匀浆器，将0.5 g植物组织粉碎成细粉，然后将组织转移到2.0 ml离心管。
3） 加入800 µl预热的2-Me/CTAB，混合使之充分湿润，于65℃温育20 min，不时颠倒混匀。
4） 待冷至室温后，加入800 µl氯仿/异戊醇（24:1），颠倒混匀至溶液呈乳浊状----但不要振荡。25℃，10000 rpm离心10 min。
5） 上清（~700 µl）转移至另一干净的离心管中，加入5 µl RNaseA贮液，37℃温育30 min。
6） 加入700 µl氯仿/异戊醇，颠倒混匀，25℃，10000 rpm离心10 min。
7） 上清（~600 µl）转移至另一干净的1.5 ml离心管中，加入600 µl异丙醇，颠倒混匀，室温或-20℃放置20 min。
8) 25℃，12000 rpm，离心10 min，收集沉淀。
9） 去上清，加1 ml70%乙醇洗涤沉淀两次。（25℃，12000 rpm，离心10 min）
10）凉干DNA，溶于50 µl ddH2O,4℃保存备用。
2、SDS法
① 将0.3 g植物材料于液氮速冻，然后在研钵中将其磨碎，将粉末转至2 ml离心管中。
② 加入1.2 ml预热至65℃的提取缓冲液（其中加入3 μl β—巯基乙醇，增加DNA的稳定性），置65℃水浴中放置30分钟，不时颠倒混匀。
③ 加入0.45 ml 5M的醋酸钾，混匀，冰浴20分钟，在10000 rpm离心20 min。需要的话，Miracloth纱布过滤除去沉淀，上清液转入另一离心管中。
④ 加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒混匀，12000 rpm离心15 min。
⑤ 转移上清液到另一新离心管中，加5 μl RNaseA贮液，37℃温育30 min。
⑥ 加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），轻轻颠倒混匀，12000 rpm离心15 min。
⑦ 转移上清液到另一新离心管中，加入0.7V异丙醇，轻轻颠倒混匀，-20℃放置30分钟沉淀核酸。
⑧ 25℃，12000 rpm，离心10 min，收集沉淀。
⑨ 弃上清，70%乙醇洗两次。
⑩ 凉干DNA，溶于50 µl ddH2O,4℃保存备用。
2.分离DNA和RNA的方法有哪些
盐析法 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解 而使杂质沉淀 或者相反 以达到分离目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后减小 在DNA溶解度最低时 DNA从溶液中析出 而其他杂质还留在溶液中 达到粗提取的目的
酶水解法 采用RNase（可以买）水解杂质RNA如果混入DNase酶可以采用100度加热15min使其失活 RNase不会失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、时加入蛋白酶K或加碘乙酸钠
3.RNA的提取方法有哪些
通过变性剂破碎细胞或者组织，然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA，再经过沉淀，洗涤，晾干，最后溶解。
但是由于RNA酶无处不在，随时可能将RNA降解，所以实验中有很多地方需要注意，稍有疏忽就会前功尽弃。 0 T3 z( F& _, D6 c% ^" h6 Y A6 _RNA提取的一般步骤 - O: Y+ x$ p# s8 U4 M9 S 所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。
但其中最关键的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径：提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。
第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。（ O( g; ^+ K) f+ i& ]% P 实验步骤： * l& d6 s5 e( q1 F( g2 | j, ^0 s 破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。
6 D8 }. Q; Y, g* X 1、破碎组织和灭活RNA酶可以同步进行，可以用盐酸胍、硫氰酸胍、NP-40、SDS、蛋白酶K等破碎组织，加入β-ME可以抑制RNA酶活性。 " s% f, `0 [1 d* m! ]0 e2、分离RNA一般用酚、氯仿等有机溶剂，加入少量异戊醇，经过此步，离心，RNA一般分布于上层，与蛋白层分开。
& X. P) i) Y; L# u/ [3、沉淀RNA一般用乙醇、3M NaAc(pH-5.2)或异丙醇。2 @0 d& z7 ?+ i, g1 @ 4、洗涤RNA使用70%乙醇洗涤，有时，为避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗涤之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能过于干燥，否则不易溶解。
3 @% V" o9 v+ I1 J2 o9 k" z5、融解RNA一般使用TE。 ; L5 f. n6 }( S1 t% Z& J6、保存RNA应该尽量低温。
为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，对于长期贮存更是如此。从大鼠肝脏中提取的RNA，在水中贮存一个星期就基本降解了，而从大鼠脾脏中提取的RNA，在水中保存3年仍保持稳定。
另外，长度大于4kb的转录本对于痕量RNase的降解比小转录本更敏感。为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。
用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的杂物。来源于胰脏的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。
当准备使用RNA时，可以使用下列方法沉淀RNA：加入NaAc至0.3M,12,000*g离心5分钟。 & P3 [7 m* ^$ U$ _" ? : F" x u* N( ?( I氯化锂法提取总RNA: " u; }' I! r' ^' ^& l 本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶，用氯化锂选择沉淀RNA，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高，小RNA片断丢失的缺陷。
# ~* S: }9 `* r4 Z3 P 试验试剂： " d$ r6 Q+ _. I8 Q1、氯化锂/尿素溶液【氯化锂126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，过滤灭菌】 7 _8 w1 t" o9 a' q! i4 Z2、悬浮液【10mM? Tris-HCL (pH7.6) ,1mM? EDTA (pH8,0) ,0.5%SDS】 ！ m8 Q4 R, ]& y: b# `7 d试验步骤：7 [6 ?$ `* }; o7 _ Z' { 1、对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5-10ml氯化锂-尿素溶液，匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂-尿素溶液手工匀桨，并转移至Eppendof管中。& Y) b: E, Q" l/ ^ Q: \$ s 2、匀桨液在0-4℃放置4小时后，12000g离心30分钟。
x- C6 D- N/ N0 K! t2 a 3、取沉淀，加入原匀桨液1/2体积的氯化锂-尿素溶液，重复步骤2。 ) y- x) S0 K9 y6 j, e4、沉淀用原匀桨液1/2体积的氯化锂-尿素溶液复溶后，加入等体积酚/氯仿/异戊醇在室温放置15-30分钟并不时摇动混匀，4000g离心5分钟。
3 d2 v' i1 ~( ~* D5、取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，-20℃放置1小时，5000g离心。 L4 a' Q4 u" l: a* K% Z$ ?( e6、70%乙醇洗沉淀一次。
真空干燥。3 }; r0 [/ Q' G9 q 7、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分装，于-70℃保存。
0 f. X% R( H% B7 g ! y7 j5 u$ C' |) [% ~! J3 D: Q蛋白酶-热酚法6 |" ^0 b* [) P3 S* c4 b4 H4 l 本方法适合于病毒RNA的提取 * I( i+ b# r! K试验试剂： $ ？4 [7 H9 `) J1、蛋白酶K（终浓度50ug/ml）, J5 p l6 V/ t7 [/ I 2、2*缓冲液：1%SDS? 20mMTris-HCL (pH 7.6)? 0.2MnaCL9 h, p ] y+ \$ Z) O 试验步骤：# W3 v8 G1 [$ ]5 y 1、提纯病毒液中加入等体积缓冲液、蛋白酶K,37℃40-50分钟。 - K0 p/ E' G0 M# Q- z7 n, {# d2、加入等体积65℃预热的酚溶液，轻徭，在65℃保温5分钟后再轻徭。
w! `; W( ~, E: i3 ^3、离心，取上清，氯仿抽提一次。， |（ Z0 d; j2 @7 m+ d2 Q& x H 4、取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，-20℃放置1小时，5000g离心（10000g,10min）。
7 [/ w, h2 d6 U$ k5、70%乙醇洗沉淀一次。真空干燥。
% A5 Y; {( w% ]3 a* y, O e) P6、RNA溶解液溶解沉淀，得RNA，分装，于-70℃保存。植物RNA提取过程中难点的相应对策 植物RNA提取过程中难点的相应对策 ） o5 B7 d/ Q3 _酚类化合物的干扰及对策： 。
4.分离DNA和RNA主要方法有哪些
盐析法 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解 而使杂质沉淀 或者相反 以达到分离目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后减小 在DNA溶解度最低时 DNA从溶液中析出 而其他杂质还留在溶液中 达到粗提取的目的酶水解法 采用RNase（可以买）水解杂质RNA如果混入DNase酶可以采用100度加热15min使其失活 RNase不会失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、时加入蛋白酶K或加碘乙酸钠。
5.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡，使乳化，再离心除去蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较，后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时，加入适量去污剂，如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离.在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用，在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠，并称SSC溶液，提取DNA.
(2).阴离子去污剂法：
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，因为阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA .此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出.此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇，立即用搅拌法搅出.然后分别用66% 80%和95%乙醇以及丙铜洗涤，最后在空气中干燥，既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高，故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良，在提取过程中加入SDS.
6.分离DNA和RNA主要方法有哪些
[思路分析]：①取鸡血细胞液（其红细胞椭圆具核，除骆驼外，猪、羊、狗等哺乳动物红细胞无核），或取新鲜猪肝、菜花、洋葱等材料.虽然在细菌的转化实验中提取的是无核细胞中的DNA，但一般而言，均是从具核的生物材料中提取DNA.当然，在提取出的DNA中也含有一定量的胞质DNA，即线粒体DNA和叶绿体DNA.值得推介的材料是洋葱，取材容易，操作简便，效果明显.将家用加盐洗洁精与洋葱碎屑混合研磨并过滤后，再加酒精，微摇后即出现白色的毛絮状DNA混合物.②使红细胞溶血破膜以及化学药剂十二烷基磺酸钠 SDS（洗洁精的主要成分）或三氯乙酸溶膜.在低渗溶液中，如加蒸馏水使血细胞过度渗透吸水直至破裂，同时用玻棒加速血细胞及核破裂，经一级过滤后滤出液为DNA核蛋白和RNA核蛋白.对于菜花、洋葱等植物材料，在研磨破坏其细胞壁的同时，可考虑适量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解.③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA.在浓氯化钠溶液（2 mol/L）中，DNA核蛋白的溶解度很大，而RNA核蛋白的溶解度很小.在稀氯化钠溶液（0.14mol/L）中DNA的溶解度最低，蛋白质的溶解度很高而出现盐溶现象，经二级过滤后滤出液主要为DNA粗制品.④DNA不溶于酒精，经三级过滤后，再利用乙醇沉淀法使其他物质溶于酒精而进一步纯化DNA.⑤二苯胺或甲基绿鉴定法即DNA遇二苯胺（沸水浴）被染成蓝色，遇甲基绿被染成蓝绿色，且颜色的深浅与DNA纯化程度有关.在此过程中设计对照实验，以增强实验中二苯胺对DNA专一性显色结果的可信度.分离DNA和RNA主要方法有哪些。
7.DNA的提取方法有多少种
DNA的提取方法有7种：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇bai沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制du备、碱变性快速制备。
DNA的提取原则
1、保证核酸一级结构的完整性；
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应zhi降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
扩展资料
提取daoDNA的注意事项
1、各操作内步骤要轻柔，尽量减少DNA的人为降解。
2、注意防止非核酸类成分干扰。
3、要减少DNA的降解，促进DNA与蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA过程中所用到的试剂和器材容要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。
5、所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。
参考资料来源：百度百科-dna提取
