1。
低离子强度盐水试验:可提高抗D抗体与D阳性红细胞结合率,并提高其灵敏度。 2。
酶介质法:木瓜酶或菠萝酶可以破坏红细胞表面的唾液酸,使红细胞膜失去电荷,缩小红细胞间的距离;同时酶还可以部分地改变红细胞表面结构,使某些隐蔽的抗原得以暴露,增强凝集性;且对IgG的作用大于IgM,故有利于检出不完全抗体。 (1)试剂:IgG型抗D标准血清、1%木瓜酶(或菠萝蛋白酶)溶液、5%D阳性红细胞生理盐水悬液、5%D阴性红细胞生理盐水悬液。
(2)注意事项:①Rh血型系统的抗体多由获得性免疫产生,血清中很少有天然抗体,故不需要做反定型。 ②对照:酶易失活,故每次试验都要设置阳性对照。
若阳性对照不出现凝集,表明酶或抗血清已经失效。酶活性过强出现假阳性结果,因而要设立阴性对照,以排除假阳性。
只有在阳性对照管出现凝集而阴性对照管不凝集的情况下,才说明被检管的结果是可靠的。③结果阴性:说明被检红细胞上无相应抗原,但由于DU抗原性弱,因此,如被检者无凝集,还应进一步检查以排除DU的可能。
你这个肯定自己弄不了啊,得去医院让检验科的来啊!
鉴定方法 (1)生理盐水凝集法:①玻片法:操作简单,适于大量标本检查,但反应时间长;被检查者如血清抗体效价低,则不易引起红细胞凝集,因此,不适于反向定型。②试管法:由于离心作用可加速凝集反应,故反应时间短,而且,借助于离心力可以使红细胞接触紧密,促进凝集作用,适于急诊检查。(2)凝胶微柱法:是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体,加入试剂、标本,用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化,定量加样,确保结果准确性。
Rh血型鉴定一般指Rh系统中D抗原的检测,根据病人红细胞是否带有D抗原,分为Rh阳性和Rh阴性。
蛋白水解酶法 (包括菠萝酶、木瓜酶、无花果酶、胰蛋白酶等) 以菠萝酶介质法为例:
⑴取菠萝酶1g,加pH5.5磷酸盐缓冲液100ml,充分振摇混匀,置37℃水浴箱30
血型的遗传规律
min,离心沉淀后取上清液即1%菠萝酶液。放置4℃冰箱贮存。
⑵待检者红细胞及对照红细胞用生理盐水洗涤1次(有溶血的红细胞除外),配成5%红细胞悬液。
⑶取小试管15支,分3排,每排试管按C、c、D、E、e顺序标记。
⑷每排第1管加抗C血清,第2管加抗c血清,第3管加抗D血清,第4管加抗E血清,第5管加抗e血清各1滴。
⑸第1排各管加待检者红细胞悬液各1滴,第2排加阳性对照红细胞,第3排加阴性对照红细胞。
⑹每排各管加1%菠萝酶液1滴。
盐水介质法 ⑴试管法①取小试管3支,1支注明抗D,另1支注明阳性对照,最后1支注明阴性对照;②将室温盐水反应活性的抗D血清各1滴加入上述试管内;③抗D试管中加入1滴5%待检者红细胞(盐水、血清)
血型匹配
悬液,阳性对照及阴性对照试管中分别加入相应的阳性红细胞及阴性红细胞悬液1滴;④轻轻混匀,于3000r/min离心15s;⑤取出轻轻摆动观察有无凝集。
⑺混匀,置入37℃水浴箱中1h观察结果,若无凝集,应查找原因。
1.AB0血型鉴定原理
常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原,以及血清中存在的血型抗体,依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有:①正向定型:用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。②反向定型:用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定:凡红细胞出现凝集者为阳性,呈散在游离状态为阴性。ABO血型定型原则见表1-5-2。
2.鉴定方法
(1)生理盐水凝集法:①玻片法:操作简单,适于大量标本检查,但反应时间长;被检查者如血清抗体效价低,则不易引起红细胞凝集,因此,不适于反向定型。②试管法:由于离心作用可加速凝集反应,故反应时间短,而且,借助于离心力可以使红细胞接触紧密,促进凝集作用,适于急诊检查。
红细胞亚型抗原性弱,如抗A抗B标准血清效价低时,易造成漏检或误定。如加用O型(抗A、B)血清和反向定型,可避免此类错误。
玻片法凝集结果判断:红细胞呈均匀分布,无凝集颗粒,镜下红细胞分散。在低倍镜下凝集程度强弱判断标准:①呈一片或几片凝块,仅有少数单个游离红细胞为(++++)。②呈数个大颗粒状凝块,有少数单个游离红细胞为(+++)。③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒,游离红细胞约占1/2为(++)。④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察,每凝集团中有5~8个以上红细胞凝集为(+)。⑤可见数个红细胞凝集在一起,周围有很多的游离红细胞(±)。⑥可见极少数红细胞凝集,而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。⑦镜下未见细胞凝集,红细胞均匀分布为(-)。
(2)凝胶微柱法:是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体,加入试剂、标本,用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化,定量加样,确保结果准确性。
3.抗A、抗B和抗AB标准血清标准
准血清均采自健康人,并应符合下述条件:①特异性:只能与相应的红细胞抗原发生凝集,无非特异性凝集。②效价:我国标准抗A和抗B血清效价均在1:128以上。③亲和力:我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s;抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时,凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价:在1:4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。
你这个肯定自己弄不了啊,得去医院让检验科的来啊!鉴定方法 (1)生理盐水凝集法:①玻片法:操作简单,适于大量标本检查,但反应时间长;被检查者如血清抗体效价低,则不易引起红细胞凝集,因此,不适于反向定型。
②试管法:由于离心作用可加速凝集反应,故反应时间短,而且,借助于离心力可以使红细胞接触紧密,促进凝集作用,适于急诊检查。(2)凝胶微柱法:是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。
血型抗体为单克隆抗体,加入试剂、标本,用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化,定量加样,确保结果准确性。
Rh血型鉴定一般指Rh系统中D抗原的检测,根据病人红细胞是否带有D抗原,分为Rh阳性和Rh阴性。蛋白水解酶法 (包括菠萝酶、木瓜酶、无花果酶、胰蛋白酶等) 以菠萝酶介质法为例:⑴取菠萝酶1g,加pH5.5磷酸盐缓冲液100ml,充分振摇混匀,置37℃水浴箱30 血型的遗传规律min,离心沉淀后取上清液即1%菠萝酶液。
放置4℃冰箱贮存。⑵待检者红细胞及对照红细胞用生理盐水洗涤1次(有溶血的红细胞除外),配成5%红细胞悬液。
⑶取小试管15支,分3排,每排试管按C、c、D、E、e顺序标记。⑷每排第1管加抗C血清,第2管加抗c血清,第3管加抗D血清,第4管加抗E血清,第5管加抗e血清各1滴。
⑸第1排各管加待检者红细胞悬液各1滴,第2排加阳性对照红细胞,第3排加阴性对照红细胞。⑹每排各管加1%菠萝酶液1滴。
盐水介质法 ⑴试管法①取小试管3支,1支注明抗D,另1支注明阳性对照,最后1支注明阴性对照;②将室温盐水反应活性的抗D血清各1滴加入上述试管内;③抗D试管中加入1滴5%待检者红细胞(盐水、血清) 血型匹配悬液,阳性对照及阴性对照试管中分别加入相应的阳性红细胞及阴性红细胞悬液1滴;④轻轻混匀,于3000r/min离心15s;⑤取出轻轻摆动观察有无凝集。⑺混匀,置入37℃水浴箱中1h观察结果,若无凝集,应查找原因。
一、什么是Rh血型?
人类红细胞血型由多达二十多种的血型系统组成,ABO和Rh血型是与人类输血关系最为密切的两个血型系统。当一个人的红细胞上存在一种D血型物质(抗原)时,则称为Rh阳性,用Rh(+)表示;当缺乏D抗原时即为Rh阴性,用RH(-)表示。
二、Rh(-)属稀有血型吗?
Rh(-)的分布因种族不同而差异很大,在白种人中的比例较高,约百分之十五。中国人群中,新疆维吾尔等少数民族Rh(-)的分布为百分五;蒙古族人接近百分之一;汉族人所占的比例极少,仅千分之三,属稀有血型。如果同时考虑ABO和Rh血型系统,在汉族人群中寻找AB型Rh(-)同型人的机会不到万分之三,十分罕见。
三、Rh血型是如何遗传的?
Rh(-)基因是隐性基因。当Rh(+)的父母带有RH(-)基因,且同时遗传给子代时,其孩子即表现为Rh(-),双亲有一人是Rh(-)时,其子女为Rh(-)的机会增大,反之机会减少。
四、Rh(-)有何意义?
无论是Rh(-)者还是Rh(+)者其差别仅仅是血型的不同,都属健康人群。但Rh(-)者遇到特殊时其临床意义不容忽视,如连续两胎母婴Rh血型不合的妊娠,很可能导致胎儿的严重伤害;又如有输血、人流等免疫史的病人再次输入Rh(+)血时,可能产生强烈的溶血性输血反应。
五、Rh(-)者如何自我保护?
请您记住这条原则:血液只能同型输注,即A型Rh(-)患者只能输A型Rh(-)血,B型的只能输B型Rh(-)血,假如您生病或手术需要输血时,您一定要将您是Rh(-)血型的情况告知医生,以便医生及早和市血液中心联系,组织您所需要的Rh(-)血源。假如您是未育女性,请您做好计划生育以避免人工流产,若您已有流产或输血史,妊娠期务必到血站血型室进行新生儿溶血病的预测检查,以防止今后新生儿溶血病的发生。
紧急情况时能否及时向Rh(-)患者供应同型血液是一件性命悠关的大事,血液中心的血型工作者以保障每一位Rh(-)患者的输血安全为己任,常年不懈地对数以万计的供血人群进行Rh(-)血型筛选,一旦筛选到Rh(-)血,这袋血就立即做上特殊的标记并保存在4℃冰箱中以备急需。
七、Rh(-)者输血供应有保障吗?
尽管输血工作者防患于未然已竭尽全力,但紧急情况时Rh(-)者可能缺乏同型而危及生命的潜在危险依然存在。其实,消除这一困扰的方法很简单:即所有Rh(-)者同舟共济,在随时作为可能的受血者的同时,也随时作为一名高尚的供血者,这样您和所有的Rh(-)者的生命都将得保障。
血型与输血原则
一、血型与红细胞凝集
若将血型不相容的两个人的血滴放在玻片上混合,其中的红细胞即聚集成簇,这种相容称为凝集(agglutination)。红细胞的凝集有时还伴有溶血。当血型(bolld group)不相容的血液输入循环血液中时,在血管内可发生同样的情况,此凝集成簇的红细胞可以堵塞毛细血管,溶血将损害肾小管,同时常伴发过敏反应,其结果可危及生命。
造成红细胞凝集的机制是抗原-抗体反应。凝集原的特异性完全取决于镶嵌入红细胞膜上的一些特异糖蛋白,在凝集反应中糖蛋白起着抗原的作用,因而称它们为凝集原(agglutinogen)。能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异抗体则称为凝集素(agglutinin)。凝集素是由γ-球蛋白构成的,它们溶解在血浆中。发生抗原-抗体反应时,由于每个抗体上具有10个左右与抗原结合的部位,抗体在若干个带有相应抗原的红细胞之间形成桥梁,因而使它们聚集成簇。
人血液中,在红细胞上都具有一套特异的凝集原。目前在红细胞上已确定有许多种不同的抗原,大约有30种抗原能引发相当剧烈的机体反应。血型是指红细胞上特异抗原的类型。表3-5中列出了ABO、Rh、MNSs、P等9个最重要的血型系统和它们所具有的特异抗体。动用现代免疫学手段可以在红细胞膜上鉴别出约400种不同特征的抗原。如果只将其中已经分类的抗原型作为依据,就有3亿种不同的可能组合,可见血型抗原最为重要的血型是ABO系统和Rh系统。
RhD抗原分布Rh血型鉴定一般指Rh系统中D抗原的检测根据病人红细胞是否带有D抗原分为Rh阳性和Rh阴性。
鉴定方法Rh血型系统有5种抗血清,可以检出18种不同的型别,但由于临床实验室很难得到这5种抗血清,况且在Rh 抗原中,抗原性最强,出现频率最高,临床上影响最大的是D抗原,所以临床上一般只作D抗原的鉴定,受检者红细胞能与抗D血清凝集者为Rh阳性,不凝集者为阴性。 Rh血型的鉴定方法依抗体的性质而定,完全抗体可用盐水凝集试验,不完全抗体可选用胶体介质、木瓜酶及抗人球蛋白等试验。
原理 Rh血型抗体多系不完全抗体,属IgG型。因分子短小,与红细胞上的抗原作用后,不能使红细胞靠拢凝集。
木瓜酶能破坏红细胞表面上的唾液酸,降低其表面电荷,减少红细胞之间的排斥力,红细胞得以靠拢,在不完全抗体的作用下,红细胞便出现凝集。 试剂与材料 1.Rh抗血清常用的为不完全抗D、抗C、抗E及抗D。
2.5%受检者红细胞盐水悬液 3.1%菠萝酶(或木瓜酶)溶液称取菠萝酶1.0g,溶解于100mlpH5.5磷酸盐缓冲液内。 4.0.067mol/L磷酸盐缓冲液(pH5。
5)Na2HPO45ml和KH2PO4 5ml混合而成。 5.已知Rh阳性及Rh阴性5%红细胞悬液各1份。
操作1.取试管3支,分别标明受检者及阳、阴性对照。 2.每管各加抗血清1滴。
3.按标记各管分别加不同的红细胞悬液1滴及1%菠萝酶试剂各1滴,混匀后置37℃水浴中1小时,观察结果。结果判定阳性对照管凝集,阴性对照管无凝集,被检管凝集为Rh(D)阳性,无凝集为Rh(D)阴性。
注意事项 1.应严格控制温度和时间,因Rh抗体凝集块比较脆弱,观察结果时,应轻轻侧动试管,不可用力振摇。 2.阳性对照取三人0型红细胞混合而成,阴性对照不易得到。
一般设计方法为正常AB型血清1滴,加5%D阳性红细胞悬液1;滴和菠萝酶试剂1;滴混匀,与受检管一同置37℃水浴18小时。 Rh血型鉴定正常值Rh+,称作“Rh阳性”、“Rh显性”,表示人类红细胞有“Rh因子”; Rh-,称作“Rh阴性”,“Rh隐性”,表示人类红细胞没有“Rh因子”。
Rh血型鉴定意义 1)中国汉族人的Rh阴性率为0。34%,绝大多数人为Rh阳性。
故由Rh血型不合引起的输血反应,相对较ABO血型少; 2)Rh血型系统一般不存在天然抗体故第一次输血时不会发现Rh血型不合但Rh阴性的受血者接受了Rh阳性血液后可产生免疫性抗Rh抗体如再次输受Rh阳性血液时即可发生溶血性输血反应 3)Rh阴性母亲孕育胎儿为Rh阳性胎儿的红细胞经胎盘进入母体刺激母体产生抗Rh抗体再经胎盘进入胎儿体内由于第一胎产生的抗Rh抗体很少极少发生新生儿溶血病第二次怀孕Rh阳性胎儿所产生抗Rh抗体增多可致新生儿溶血病若Rh阴性孕妇曾输过Rh阳性血液史或第一胎因Rh血型不合流产史即令第一胎也可发生胎儿溶血病。
我们常用的血型系统是ABO血型。
人类还有一些其他血型系统(分类方法不一样而已),Rh血型就是人类常见的血型系统之一。
Rh血型不合与ABO血型不合一样,同样可以导致输血后的溶血反应。
在Rh阴性患者输入了Rh阳性血液以后才会产生抗Rh抗体(所以如果某个人RH阴性的话,第一次输入RH阳性血一般不会出事)。
如果该患者再次输入Rh阳性血液,便须做Rh血型鉴定,以避免可能出现的因Rh血型不合引起的溶血反应,尽管其概率很低。
(验血时,检查Rh血型主要是为了避免上述的溶血反应。绝大多数的汉族人是Rh阴性的,但还是有例外。)
(Rh的检查对孕产妇来说挺重要)对已知的Rh阴性患者则一定要输Rh阴性血液。Rh阴性的孕妇,孕育的胎儿为Rh阳性时,如输入Rh阳性血液,也会发生溶血反应。母亲与胎儿Rh血型不符还可能引起新生儿溶血症。因此当怀疑是由于Rh血型不合造成的新生儿溶血时,应检查母亲及新生儿的Rh血型。
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