盐析法 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解 而使杂质沉淀 或者相反 以达到分离目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后减小 在DNA溶解度最低时 DNA从溶液中析出 而其他杂质还留在溶液中 达到粗提取的目的
酶水解法 采用RNase(可以买)水解杂质RNA如果混入DNase酶可以采用100度加热15min使其失活 RNase不会失活 反之采用DNase可以提取RNA 混了RNase、时加入蛋白酶K或加碘乙酸钠
[思路分析]:①取鸡血细胞液(其红细胞椭圆具核,除骆驼外,猪、羊、狗等哺乳动物红细胞无核),或取新鲜猪肝、菜花、洋葱等材料.虽然在细菌的转化实验中提取的是无核细胞中的DNA,但一般而言,均是从具核的生物材料中提取DNA.当然,在提取出的DNA中也含有一定量的胞质DNA,即线粒体DNA和叶绿体DNA.值得推介的材料是洋葱,取材容易,操作简便,效果明显.将家用加盐洗洁精与洋葱碎屑混合研磨并过滤后,再加酒精,微摇后即出现白色的毛絮状DNA混合物.②使红细胞溶血破膜以及化学药剂十二烷基磺酸钠 SDS(洗洁精的主要成分)或三氯乙酸溶膜.在低渗溶液中,如加蒸馏水使血细胞过度渗透吸水直至破裂,同时用玻棒加速血细胞及核破裂,经一级过滤后滤出液为DNA核蛋白和RNA核蛋白.对于菜花、洋葱等植物材料,在研磨破坏其细胞壁的同时,可考虑适量加入乙二胺四乙酸EDTA以防止DNA酶解.③利用DNA和RNA溶解度的不同析出DNA.在浓氯化钠溶液(2 mol/L)中,DNA核蛋白的溶解度很大,而RNA核蛋白的溶解度很小.在稀氯化钠溶液(0.14mol/L)中DNA的溶解度最低,蛋白质的溶解度很高而出现盐溶现象,经二级过滤后滤出液主要为DNA粗制品.④DNA不溶于酒精,经三级过滤后,再利用乙醇沉淀法使其他物质溶于酒精而进一步纯化DNA.⑤二苯胺或甲基绿鉴定法即DNA遇二苯胺(沸水浴)被染成蓝色,遇甲基绿被染成蓝绿色,且颜色的深浅与DNA纯化程度有关.在此过程中设计对照实验,以增强实验中二苯胺对DNA专一性显色结果的可信度.分离DNA和RNA主要方法有哪些。
首先要清楚DNA和RNA的区别,然后依此来设计实验RNA与DNA最重要的区别一是RNA只有一条链,二是它的碱基组成与DNA的不同,RNA没有碱基T(胸腺嘧啶),而有碱基U(尿嘧啶).所以导致他们有以下性质上的不同.1.两性解离:DNA无,只有酸解离,碱基被屏蔽(在分子内部形成了H键).RNA有,有PI.2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子长度/直径决定,DNA为线状分子,RNA为线团.3.碱的作用:DNA耐碱RNA易被碱水解.4.显色反应:鉴别DNA和RNA+浓HCl RNA ------→ 绿色化合物DNA ------→ 蓝紫色化合物苔黑酚二苯胺啡啶溴红(荧光染料)和溴嘧啶都可对DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的离心和电泳显色可用它们.DNA和RNA的鉴别染色利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA.吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定,非固定细胞核酸,或作溶酶体的一种标记.观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体.虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果,但该方法已被许多实验室广泛采用.5.溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA.DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚来沉淀RNA.6.紫外吸收:核酸的λm=260nm,碱基展开程度越大,紫外吸收就越厉害.当A=1时,DNA:50ug/ml,RNA和单链DNA:40ug/ml,寡核苷酸:20ug/ml.用A260/A280还可来表示核酸的纯度.7.沉降速度:对于拓扑异构体(核苷酸数目相同的核酸),其沉降速度从达到小依次为:RNA ; 超螺旋DNA > 解链环状DNA ; 松弛环状DNA ; 线形DNA也就是在离心管中最上层是线形DNA,最下面是RNA.8.电泳:核苷酸、核酸均可以进行电泳,泳动速度主要由分子大小来决定,因此,电泳是测定核酸分子量的好方法.9.DNA分子量测定最直接的方法:用适当浓度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以将其他形式的DNA变成线形DNA,用电镜测出其长度,按B-DNA模型算出bp数,根据核苷酸的平均分子量就可计算出DNA的分子量.。
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