待检红细胞悬液不宜过稀或过浓;
所用的试剂必须在有效期内;
气温较高时,为防止标本干涸所致的假阳性,可将玻片放入有一湿棉球的平皿中。若室温过低,可将玻片置于28℃右右的温箱中;
注意区分红细胞的叠连现象与凝集现象。前者滴加生理盐水1~2滴混匀后,红细胞即可分散成浑浊状,而后者则不因此而改变;
利用已知A型和B型红细胞与一系列稀释的待检血清作凝集反应,根据凝集效价(以出现凝集的最高稀释度)的高低可作为判断体液免疫功能的一项指标。多数免疫功能正常的半岁婴儿,除AB型外,血清中相应的抗A效价≥1:8,抗B效价≥1:4。一岁后,凝集效价也相应提高。
聚凝胺交叉配血试验的注意事项如下: ①可以用EDTA抗凝之血浆代替血清使用; ②若患者血清(血浆)含肝素,如血液透析患者,须多加4-6滴Polyrene溶液以中和肝素; ③若试剂使用前为低温C存,请恢复室温再行操作; ④加做辅助性抗球蛋白试验,目的是增 加检测抗-K的敏感性,对检测其他红细胞抗体无帮助; ⑤在冬天室温极低的情况下,操作交 叉配血试验,某些患者血清中可能含有冷凝集素,可导致假阳性的结果出现。
若有此怀疑, 建议在最后滴入复悬液时,将试管立即置入37°C水浴中,轻轻摇动试管混合,并在30秒内 观察结果; ⑥离心力所对应转速为3400rpm。
交叉配血试验,是指受血者的血清加供血者的红细胞悬液,供血者的血清加受血者的红细胞悬液,同时进行凝集试验。
交叉配血试验包括主试验和副试验两种。前者用受血者的血清与供血者的红细胞悬液做试验,以发现受血者的血清中是否含有与供血者红细胞反应的抗体,又称直接配合或主侧配合。
后者则用供血者的血清与受血者红细胞做试验,以发现供血者血清中是否有不合抗体,又称间接配合。其目的是验证供者与受者ABO血型鉴定是否正确,以防止溶血性输血反应。
此外,也可检出ABO血型系统的不规则凝集素,以及发现ABO系统以外的其他血型抗体。交叉配血试验有多种方式,如盐水法、胶体介质配血法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。
输血时,不仅要鉴定ABO血型和Rh血型,即使输入同型血,或受血者再次接受同一供血者的血液,都必须做交叉配血试验。
操作方法:
1、取出3支试管分别标记主、次及对照管测试。
主测管:2113 病人血清2滴 + 献血者3%~5%血球(洗涤不洗涤均可)52611滴,血球用生理盐水稀释
次测管: 献血者血清2滴 + 病人3%~5%血球(洗涤不洗涤均可)1滴,血球用生理盐水稀释
对照管: 2滴阳性对照血清 + 献血者3%~5%血球(洗涤不洗涤均可)1滴,血球用生理盐水稀释
2、各加低离子介溶液0.65ml, 轻轻混合均匀,于室温下,静置1分钟
3、滴加2滴凝聚胺溶液,轻轻混合均匀,于室温下静置15秒钟
4、离心,3400转/10秒钟,然后把上清夜倒掉,不要倒干,使管底保留大4102约0.1ml的液体
5、测红血球有无变成1653凝块(即凝集反应),如果没有凝块,则版必须重做。权重做后,仍然没有凝集现象出现,可能试剂失效,请与代理商或原厂商联系
6、加入2滴复悬液,并轻轻混合,观察结果。若为凝聚胺引起的非免疫性凝集,应该在1分钟内散开;若异体抗体所引起的免疫性凝集,则不会散开
7、倒在玻片上用肉眼或显微镜观察有无凝集,如有凝集反应,表示不合,此献血者的血液不宜给病人使用;如无凝集反应,表示献血者的血液适合给病人输注。
实验完毕后将聚凝胺试剂放回冰箱内。
⑴可以用含EDTA之血浆代替血清使用。
⑵若病人血清(血浆)含肝素,如洗肾患者,须多加4—6滴Polyrene溶液以中和肝素。⑶若试剂使用前为低温贮存,请恢复室温再行操作。
⑷加做辅助性抗球蛋白试验,目的是增加检测抗-K的敏感性,对检测其他红细胞抗体无帮助。 ⑸在冬天室温极低的情况下,操作交叉配血试验,某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素,可导致假阳性的结果出现。
若有此怀疑,建议在最后滴入Resuspending时,将试管立即置入37℃水浴中,轻轻摇动试管混合,并在30秒内观察结果。 ⑹离心力所对应转速为3400rpm.。
输血前1、输血前当晚要有充足的睡眠,精神状态良好; 2、输血前一天和当天2113早晨,不要吃油腻食物; 3、不要空腹输血,应当吃些清淡的食物,如稀饭、馒头、面包等。
4,思想上有放松,不要对输血觉得有5261负担。献血后:1、拔针后前臂伸直后稍上抬,用三个手指用力按压针眼10分钟以上,不要揉搓针,24小时内勿清洗针眼;2、输血后1-2天应适当4102休息,勿熬夜或进行剧烈运动,如踢足球、打篮球、跑步或驾车及高空作业等;3、少部分人抽1653血后有可能出现疲倦感、嗜睡,这大多是第一次丑血出现的生理反应现象,不必担心,适当休息可自行恢复; 4、输血后一两天内勿暴食暴饮,勿喝酒。
内在平常饮食的基础上可适当补充些蛋白质和水果。5、若针眼处有青紫现象,这是由于当时止血不好或是血管少量渗血所致,几天内会自行吸收,不会留下痕迹;若青紫面较大,可在献血二十四小时后热敷容即可消除。
6、输血后注意不要着凉,避免感冒。
材料和试剂 诊断用人血型抗A血清、诊断用人血型抗B血清(常在血清中加入不同颜色的染料以示区别,如A型红色,B型蓝色)、生理盐水、供血者血清、受血者血清、供血者的2%红细胞悬液、受血者的2%红细胞悬液。
器具 凹玻片或载玻片、小试管、尖嘴滴管、无菌刺血针、牙签、酒精棉球、无菌干棉球、试管架、显微镜、记号笔等。 操作过程交叉配血1、首先准备好受血者和献血者的血样。
2、分别用生理盐水配好用受血者2·5%的红细胞盐水悬液、献血者2·5%红细胞盐水悬液。 3、主侧加受血者血清0。
5ml,献血者红细胞盐水悬液0。5ml。
4、次侧加献血者血清0。5ml,受血者红细胞盐水悬液0。
5ml。 5、混匀后,根据所用交叉配血方式,如酶技术配血法,可在37度水浴箱孵育1小时后,直接观察有无凝集或溶血;若选用盐水介质等方法,则需1000rpm离心1min;或选用一定的速度离心相应的时间,如聚凝胺试剂提供的转速和时间。
结果观察 先观察上清液的颜色,然后再轻摇试管观察有无红细胞凝集现象发生; 结果判定:如试管内红细胞呈均匀混浊无颗粒出现即无凝集,上清液呈正常血清状颜色为交叉配血试验相合。如上清液呈红色即有溶血现象,红细胞成块即为凝集现象,为交叉配血试验不相合。
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