病毒核酸提取(病毒核酸的提取需要注意哪些?)
1.病毒核酸的提取需要注意哪些?
.一定要注意冰上操作，低温离心。
2.戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。
3.每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。
4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA酶污染，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。
5.吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。一定要少吸，不要贪多，RNA提取不要求量，更多的要求质。
6.最后用75%的酒精洗一次就可以，尽量减少RNA提取时间。
7.最后一步，用DEPC水溶解RNA，不要用太多的体积，以保证RNA的浓度。
提取完后，电泳观察结果，如果上面的两条带都比较清楚的话，说明RNA提取的不错，可以一次多逆转录几管，不要把RNA冻存，以后在逆转录的效果不好。
1. SARS病毒样品是具有高度传染性的样品，样品的采集、保存、运输、处理、实验应遵循国家相应的管理规范和生物安全条例，进行样品处理时必须做好相关的保护措施，并在P3实验室条件下小心操作，防止样品飞溅，以确保实验人员安全。
2. 本试剂盒只适用于体外检测。
3. 实验请分区操作：第一区为配液区：用来准备扩增所需试剂；第二区为样品提取区：准备样品和对照品处理；第三区为扩增区：PCR扩增检测。各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后立即清洁工作台。
4. 本试剂盒中，样品提取液可室温避光保存，由于提取液低温易结晶，为方便使用可先将提取液稍微加热促溶，待结晶溶解后，再置于室温避光处储存。
5. 试剂盒各样品管使用前，充分融化后混匀，并稍微离心。反应液分装时和加模板时都应尽量避免产生气泡，上机前各反应管注意盖紧，以免荧光物质污染仪器。
6. 扩增后，应避免打开PCR反应管，以免造成污染，废弃物品务请灭菌消毒后丢弃。工作台及各物品定期用10%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯处理。
7. 由于SARS为RNA病毒，提取过程中应特别注意防止RNA酶对其的降解作用，所用加样器、离心管、枪尖等均为专用，操作人员需穿洁净实验服，戴一次性手套和口罩，并且要勤换手套，减少RNA酶污染及交叉污染风险。
8. 本试剂所用的控制品为人工合成蛋白外壳包裹的假病毒，无感染性。
2.从血液标本中提取病毒核酸有什么需要注意
从血液标本中提取病毒核酸有什么需要注意
标本的采集非常重要。 细菌感染通常是通过培养的方法检测的，而病毒通常是通过抗原或者核酸来检测的。 细菌培养和鉴定，以及药敏试验，是合理使用抗菌药物的前提，好的标本决定一切，这是检验领域的一句俗话。不恰当的标本、不恰当的采集时间、不规范的采集方法，很可能造成假阴性，假阳性，杂菌污染等，延误诊断，危及生命。 对于严重感染，我们是需要确定病原菌的，标本应该选择细菌可能定植的部位，如深部痰液，胸水，血液等，标本提取的时间应该在抗菌药物使用前，最好在发生寒战的时候。标本的采集一定要规范，避免把护士或医生手上，导管，或者采集器本身的杂菌带入标本。 病毒感染较少检测，除了一些特殊的，如肝炎病毒，巨细胞病毒，以及其他一些传染病病毒等。病毒要达到一定拷贝量，才能用核酸定量的方法检测出来。而抗原抗体检测，相对来水受到标本影响较小。
3.病毒DNA提取技巧?
以下是从动物病毒中快速提取DNA的方法，请参考该方案采用离心操作，适合于从动物组织样品中快速提取病毒基因组DNA。
以下步骤都在室温下进行。 1. 取50-100mg的动物组织加入约3倍体积的生理盐水进行匀浆，充分匀浆后10,000rpm离心2min去除残余组织。
2. 取150 μl上清液至新的洁净离心管中。 3. 加入500 μl DNA提取液至上清液中，颠倒混匀，室温静置5-10min裂解病毒。
4. 把DNA吸附柱装在2ml收集管中，把裂解后的液体全部转移至DNA吸附柱中，10,000 rpm离心1 min。 5. 倒弃滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，加入400 μl洗涤液至DNA吸附柱中，10,000 rpm离心1 min。
注：洗涤液初次使用前请先加入48 ml无水乙醇。使用完立即盖上盖，以防乙醇挥发。
6. 重复步骤5。 7. 倒弃收集管中的滤液，把DNA吸附柱装回收集管中，10,000 rpm离心3 min。
8. 把DNA吸附柱装在新的洁净离心管中，加入30-50 μl洗脱液至吸附柱中央，静置1-2min,10,000 rpm离心1min，所得即为DNA溶液，可用于后续实验，若暂时不用，应于-20 ℃可储存。
4.生化实验——动物组织中核酸的提取与鉴定,在提取核酸过程中,要注
这要看你要提的核酸式DNA还是RNA.首先说一下DNA吧，一，首先要用10%的SDS处理匀浆器，这样可以除去匀浆器中的污染。
二，最好在冰上进行，防止降解
三，要加足够的RNA酶及蛋白酶K使RNA及蛋白质进行充分的降解，而利于后面的抽提
四，抽提时要注意吸取上抄层，但不要弄破中间白色的蛋白层
五，用75%乙醇洗后，带乙醇挥发后再用无菌水溶解
对于RNA 的提取最主要的就是要防止RNA酶对RNA的降解。首先就是要对所用试剂用DEPC处理。
第二，对于动物组zd织块，从负70拿出后，立即用匀浆器捣碎，以后各步骤要在冰上进行。
5.核酸检测应该注意事项
一、核酸检测流程：
(1)发热门诊患者：可在发热门诊进行核酸采集，检测结果一般在发热门诊领取。
(2)入院患者或自愿接受核酸检测人员：挂号后在各专科门诊开具相关检测单，缴费后按照指示牌到“核酸采集门诊”进行采样，检测结果可到门诊自助机打印领取。
(3)急诊需要住院的患者：急诊就诊的危急重症在急诊科进行核酸采集，采集后到相应科室住院，检测结果在门诊自助机打印领取。
二、核酸检测怎么做？
新型冠状病毒的核酸检测取样方法很简单，只要“轻轻一抹”。到了发热门诊或者是相应的检查室，工作人员会让患者张开嘴，用一个像棉签一样的拭子去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物，也可以通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物，然后放到试管里面，再交给检验科去做相应的病毒核酸的检查。
三、核酸检测的注意事项
(1)采样前请清水漱口，2小时内避免进食。
(2)采样前30分钟请勿吸烟、勿喝酒、勿嚼口香糖等。
(3)来医院体检时，请尽量选择非公共交通工具。
(4)进入采样场地前，请配合工作人员进行体温检测及流行病学调查。
(5)被检测者必须佩戴口罩，同时准备一个备用口罩。
(6)所有等候检测人员一定要保持1米以上距离，避免交谈。
(7)采集完毕后立即洗手或使用速干手消毒剂擦拭双手，戴上备用口罩。
6.核酸分离提取的原则是什么
核酸分离提取的原则
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些嗜菌体DNA有时为单链环状分子，RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子，不同类型的RNA分子可以具有不同的结构特点，如真核mRNA分子多数在3'端带有poly(A)结构，至于病毒的DNA、RNA分子，其存在形式多种多样，有双链环状、单链环状、双链线状及单链线状等。
95%的真核生物DNA主要存在于细胞核内，其它5%为细胞器DNA，如线粒体、叶绿体等。RNA分子则主要存在于细胞质中，约占75%，另有10%在细胞核内，15%在细胞器中，RNA以rRNA的数量最多（80%-85%）,tRNA及核内小分子RNA占10%-15%，而mRNA分子大小不一，序列各异。总的来说，DNA分子的总长度一般随着生物的进化程度而增大，而RNA的分子量与生物进化无明显关系。
分离纯化核酸总的原则：
1.应保证核酸一级结构的完整性；2.排除其它分子的污染。
为了保证核酸结构与功能的研究，完整的一级结构是最基本的要求，因为遗传信息全部贮存在一级结构之中，核酸的一级结构还决定其高级结构的形式以及和其它生物大分子结合的方式。对于核酸的纯化应达到以下三点要求：
1.核酸样品中不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
2. 其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度；
3. 排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时应去除RNA，反之亦然.
为了保证分离核酸的完整性和纯度，在实验过程中，应注意以下事项：
1. 尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；
2.减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH4-10的条件下进行；
3.减少物理因素对核酸的降解，物理降解因素主要是机械剪切力，其次是高温。机械剪切力包括强力高速的溶液振荡、搅拌，使溶液快速地通过狭长的孔道，细胞突然置于低渗液中，细胞爆炸式破裂以及DNA样本的反复冻贮。这些操作细节在实验操作中应倍加注意。机械剪切作用的主要危害对象是大分子量的线性DNA分子，如真核细胞的染色体DNA。对分子量小的环状DNA分子，如质粒DNA及RNA分子，威胁相对小些。高温如长时间煮沸，除水沸腾带来的剪切力外，高温本身对核酸分子中的有些化学键也有破坏作用。核酸提取过程中，一般在低温操作，但现在发现在室温快速提取与低温提取，获得核酸的质量没有太大差异.
4.防止核酸的生物降解，细胞内或外来的各种核酸酶消化核酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构，其中DNA酶，需要金属二价离子Mg2 、Ca2 的激活，使用EDTA、柠檬酸盐螯合金属二价离子，基本可以抑制DNA酶活性。而RNA酶不但分布广泛，极易污染样品，而且耐高温、耐酸、耐碱、不易失活，所以是生物降解RNA提取过程的主要危害因素.
核酸提取的主要步骤，无外乎破碎细胞，去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子，去除其它不需要的核酸分子，沉淀核酸，去除盐类，有机溶剂等杂质，纯化核酸等。核酸提取的方案，应根据具体生物材料和待提取的核酸分子的特点而定，对于某特定细胞器中富集的核酸分子，事先提取该细胞器，然后提取目的核酸分子的方案，可获得完整性和纯度两方面质量均高的核酸分子。
7.做核酸检测有什么注意事项
1、为避免出现呕吐情况采样前2小时请勿进食； 2、釆样前30分钟请勿吸烟、喝酒、嚼口香糖等； 3、尽量在单独密闭空间采样，采样后开窗通风，任何时候都不要用手或其他物品触及拭子采样冠（棉签前端）； 4、在采集口咽拭子时检测者头后仰，张口发出"啊"音，有助于暴露咽喉，采样过程无特殊不适，但部分敏感人员可能出现刺激性干咳、恶心、呕吐等症状，休息后即可缓解，受检者可配合采集人员尽量放松、保持深呼吸，大部分人员可避免不适； 5、检测者要戴口罩，同时准备一个备用口罩，要保持人际1米以上距离，勿拥挤； 6、接受咽拭子采样时，将口罩取下折叠封装在塑料袋里放入口袋中，釆集完样品后立即洗手或用免洗酒精擦拭双手，戴上备用口罩，将废弃口罩投入指定医用垃圾桶； 7、在采集鼻咽拭子前检测者应告知采集人员是否鼻中隔弯曲及鼻腔手术史，过程中可能出现鼻部酸痒感，刺激打喷嚏，可立即用纸巾或手肘遮挡； 8、鼻咽拭子采集后可能出现少量鼻腔出血，一般不需要特殊处理，如出血量较多请及时到医院进行处理。
另外，血清抗体检测不受饮食影响，无需空腹。扩展资料： 核酸检测的四类重点人群： 1、有相关症状者 出现咳嗽、发热等相关症状，尤其是近期有可能接触过确诊病例的人。
2、重点岗位工作者 医务人员，餐厅服务员，警察，外卖，配送员。 3、高风险区域人员 确诊病例曾经到过的地区的人，及其密切接触者也应该重视。
4、近期入境人群及密切接触者核酸检测法 - 搜狗百科核酸检测法（英文名：Nucleic acid detection method）是通过查找患者的呼吸道标本、血液或粪便中是否存在外来入侵的病毒的DNA和RNA，来判断是否被病毒感染的方法，是新型冠状病毒感染确诊的金标准。新冠病毒感染人体之后，首先会在呼吸道系统中进行繁殖，因此可以通过检测痰液、鼻咽拭子中的病毒核酸判断人体是否感染病毒。
/v66902107.htm?fromTitle=%E6%A0%B8%E9%85%B8%E6%A3%80%E6%B5%8B。
8.分离纯化核酸有哪些注意事项
使用方法因厂家不同而不同，下面是一氪生物技术的核酸纯化试剂使用方法及注意事项，供参考： 步骤一：使用无水乙醇与纯化水配制70%乙醇备用。
步骤二：从2-8℃冰箱中取出磁珠悬浮液，在室温条件下震荡混匀，平衡30min。 步骤三：将充分震荡混匀平衡后的磁珠加入待纯化酶反应或PCR反应产物溶液中。
磁珠加入体积分别参考图1和图2，若待纯化产物体积不足，可用纯化水或10mM Tris-HCl(pH8.0)补充至相应体积。 步骤四：用移液器反复吹打10次，将磁珠悬浮液和PCR产物或者酶反应物充分混匀，室温条件下静置5min。
步骤五：将反应板放置在磁力架上，静置2min，待溶液澄清后将上清吸走，转入废液桶内。 步骤六：向反应板中加入200μL新鲜配置的70%的乙醇，室温静置30s。
静置结束后将乙醇吸走，转入废液桶内。操作环节不可将反应板从磁力分离架上拿下或将磁珠吹散。
步骤七：重复步骤六。 步骤八：保持反应板置于磁力架上状态，室温开盖晾干2min以去除残存的乙醇。
步骤九：将反应板从磁力架上取下来，加入50μL洗脱液，移液器反复吹打10次混匀，室温静置3min。洗脱液加入量根据实际需要而定，但应不少于5μL。
步骤十：将反应板重新放置在磁力架上，室温静置1min，上清液即纯化后的DNA产物。 步骤十一：将上清液转入新的反应管或者反应板中，供下一步反应或检测使用。
